食道癌p53遺伝子治療の適応基準と補助療法の確立

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09671282
• 研究機関: 千葉大学
• 研究代表者: 落合 武徳 千葉大学, 医学部, 教授 (80114255)
• 研究分担者: 松原 久裕 千葉大学, 医学部・附属病院, 助手 (20282486) ; 島田 英昭 千葉大学, 医学部・附属病院, 助手 (20292691)
• キーワード: 食道癌 / 遺伝子治療 / p53

研究概要

ヒト食道癌培養細胞株におけるp53遺伝子、p16遺伝子の異常を検索し、p53遺伝子治療の感受性をin vitro並びにin vivoにおいて検討した.使用した食道癌細胞株は,TTn,TE-1,TE-2,TE-10,TE-11,TE-13,ECG1-10である.いずれもヒト食道扁平上皮癌から確立され,継代されている.p53遺伝伝子異常について,exon2-11について再度検索した.その結果,TTn,TE-1,TE-13,ECG1-10においてp53遺伝子異常を認めた.p16遺伝子異常について,exon2をPCRにて増幅してその欠失の有無を検索した.その結果,TE-10,TE-11,TE-13,ECG1-10において欠失を認めた.ヌードマウス可移植性を検討した.TTn及びECG1-10のみが,pretreatmentなしに移植可能であった.2週間で長径10mmの腫瘍を形成した.TE-2は,cyclophosphamideのpretreatmentにより移植可能であった.
野生型p53組み替えアデノウイルスベクター及びコントロールとして、LacZ発現ベクターを作成した.5X10e10PFU/mlの高力価のウイルス液を調製した.in vitroで,アデノウイルスベクターの感染実験を行い,感染効率を検定した.50%以上の細胞へ感染させるためには.100MOl以上必要であった.in vitroでのp53ベクターの感受性試験の結果,施行した細胞株の全てで,治療効果を確認した.p16遺伝子異常を伴わない細胞株において,若干治療低抗性を認めるが,いずれの細胞株でも効果を確認した.続いて、in vivo実験を行った.あらかじめ,作成した皮下腫瘍に対して、p53ベクター及びLacZベクターを腫瘍内へ注入した.腫瘍増殖速度は,p53ベクター注入群において、著明に抑制された.
CDDPとの併用治療によって,p53の治療効果が増強されることを確認した.

研究成果

• [文献書誌] Hideaki Shimada et al: "Detection of Serum p53 antibodies in patients with esaphageal squamous cell Carcinoma:Correlation with clinico pathological features and tumor markone" Oncology Reports. 5. 871-874 (1998)
• [文献書誌] Hideaki Shimada et al: "Detection of Serum p53 antibodies in mucosal esophageal cancer and negatire conversionafter treatment" Am J Ctastroenterology. 93. 1388-1389 (1998)
• [文献書誌] Hisahiro Matsubara et al: "Antitumor response of genetically enyeneered IL-2 expression to human esophageal carcinoma cells in mature Tcell-defective condition" Int J Oncol. 13(6). 1217-1222 (1998)