| 研究概要 |
血管新生抑制を利用した食道癌のターゲット療法開発のために血管新生促進効果のある増殖因子受容体系すなわちVEGF-RNaseを用いたVEGF/flt系を当初計画したが,遺伝子工学的にFGF-RNaseの作製に成功したのでこのFGF/FGFR系で検討した.
FGF-RNase fused proteinを岡山大学工学部より供与を受けて血管新生阻害効果を検討した.同proteinは大腸菌で発現させ,インクルージョンボディーから可溶化・リフォールディングの後精製して得た.
新鮮ヒト臍帯動脈切片培養法による検討:臍帯動脈切片はヘパリン結合セファロースカラム処理によりFGFを含むヘパリン結合性増殖因子を除去した20%FCS添加Medium199で培養し,FGF-RNase fused proteinを各種濃度で投与し,新生血管を位相差顕微鏡下に観察してNIHimageを用いて画像解析した.FGF-RNase fused proteinを0,100,200,300ug/0.5ml/well添加条件下で新生血管指数はそれぞれ3.2,2.7,2.0,0.3となり濃度依存的に血管新生抑制効果が認められた.
家兎角膜法による検討:FGF2ug投与により安定した血管新生誘導系を確立し,さらにFGF-RNase fused protein32ug含有メチルセルロースディスク法で完全な血管新生抑制を認めた.
現在FGF,RNase,FGFとRNaseの混合体の3条件下に血管新生抑制効果を検討し,fused proteinとの比較実験を行っている.
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