| 研究概要 |
1)CCA-1糖鎖の抽出と精製.糖鎖構造の決定:抽出精製を行ったCCA-1糖鎖のピリジルアミノ化を行い糖組成分析とNMR分析により,CCA-1糖鎖はLe^y糖脂質であることが明らかになった.CCA-1糖鎖はCCA-1蛋白とオクチルグルコシド存在下で結合することが出来る.
また,エンドベータグライコセラミダーゼでその結合は容易に切断できフォスフォリパーゼでは切断できないことが明らかになった.またCCA-1の結合は超音波処理などの物理的影響を受けないことも明らかになった.
2)CCA-1遺伝子導入による糖鎖を指標としたexpression cloning : CCA-1に対する抗体は糖鎖部分の抗体のみが作成されたことから,蛋白のexpression cloningは現時点では不可能であると判断された.
3)CCA-1糖鎖とCCA-1蛋白の結合と癌細胞におけるCCA-1の役割: 大腸癌細胞ではCCA-1は組織因子やHLA-DRと比較して高率に発現し凝固活性の多くを担っていることが示された.大腸癌原発巣におけるLe^y糖脂質の発現は予後や癌転移との関連は認められなかった.しかし,大腸癌組織と正常大腸組織の比較では癌組織のみにLe^y糖脂質依存性の凝固活性(CCA-1活性)が認めらCCA-1が生体内で凝固活性を有す事が示された.大腸癌細胞のCCA-1活性はアポトーシスの誘導やTGF-β1の刺激で上昇する事が確認された.また細胞周囲のカルシウム濃度もCCA-1活性の発現調節をすることが明らかになった.
4)他の糖脂質と癌細胞の凝固活性: Le^y糖脂質以外のLe^x,s-Le^x,Le^Aなどの糖脂質についてもモノクローナル抗体を用いて癌細胞の凝固活性との関連を検討したところ凝固活性の抑制が認められたことから他の糖脂質も血液凝固活性に関連することが示唆された.
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