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平成9-10年度には本助成により、次の5つの内容に関し研究を行った。
(1) α-gal knock out Pigの作成開発を目的とし、α-gal epitopeを欠損したブタのcell lineを樹立することをめざした。Materialはブタ内皮細胞由来のcell lineとし、ネオマイシン耐性遺伝子およびチミジンキナーゼ遺伝子を結合させることによって、selectionする事を試みた。しかし、現時点では、α-Galのknock outには至っていない。
(2) ラットの摘出心に対し4℃、60分という条件下でアデノウイルスをベクターとしてEx Vivo遺伝子導入を行い同系ラットに移植した。その結果、安全にかつ効率よく導入できることを示した。
(3) EB-Virus episomal Vectorと、conventionalなplasmid vectorを用いGene Gunによる遺伝子導入実験を行った。その結果、EBV-vectorでは最長6週間発現し、他臓器での影響はなかった。以上よりGene Gun法による心臓へのin vivo遺伝子導入は有用な方法と考えられ、EBV-vectorは、導入するプラスミドの発現持続に関与することが考えられた。
(4) ラットに対し、EB-Virus episomal Vectorを用いたIn Vivo及びIn vitroにて遺伝子導入をおこなった。導入後短期間ではEBV-vectorの方がいずれの培養細胞においても有意に酵素活性が高く、in vivoの検討にてもEBV-vectorの方が強く発現していた。以上より、導入後短期間において、EBV-vectorはより強く発現させうることが判明した。
(5) ブタ-イヌの異種移植モデルにて凍結保存大動脈弁の移植実験をおこなった。光学顕微鏡所見・走査電子顕微鏡による検索の結果、異種大動脈弁は凍結保存することにより免疫原性が低下すると考えられ、凍結保存法の変更と確立などにより、臨床応用も可能であると予想された。
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