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ヒト脳腫瘍組織片(良性神経膠腫、悪性神経膠腫および正常脳白質)を用いて、同一凍結材料から、病理組織標本用とmRNA抽出用の連続切片を作成し、まずヘマトキシリンエオジン染色で正常脳組織、および腫瘍の悪性度を確認した。次に連続切片から抽出したmRNAを用いてRT-PCRを行い、それぞれの組織でのLRPおよびuPA receptorのmRNAの発現を調べた。さらに同一材料からGAPDHのmRNAをコントロールとして検出して、uPA receptorおよびLRPの発現量を半定量的に検討した。また、RT-PCRに用いた組織片の連続切片を用いてLRPの免疫染色を行い、LRPの組織中での局在を検討した。悪性神経膠腫、特にglioblastomaではLAP mRNAが高頻度に発現されて、免疫染色法でもLRPは腫瘍細胞と腫瘍血管に陽性所見が得られた。正常脳組織中ではneuronに陽性所見がみられた。転移性および原発性肺腺癌ではその発現は殆どみられなかった。各種ヒトGlioma細胞株および腺癌細胞株においても同様にLRP mRNAの発現を検討し、Glioma細胞株ではLRPの発現がみられた。結論として、LRPは悪性神経膠腫の腫瘍細胞膜および腫瘍血管に発現され、uPA systemの代謝およびuPA receptorのリサイクルを促進することにより悪性神経膠腫の浸潤能および腫瘍組織内での血管新生に関与している可能性が示唆された。現在、悪性神経膠腫のcell lineを用いたin vitroでのtransfectionの実験を進めている。LRPのcDNAを、cDNA libraryから単離した。単離されたcDNAに特異的なprimerを用いてPCRで、細胞内部分および細胞外リガンド結合部位構造が欠落したtruncated cDNAを作成する段階である。これらのstable transfectantを単離し、In vitro invasion assay用のチャンバーを用いて、Matrigel in vitro invasion assayを行い、LRP cDNAをtransfectionしたcell lineおよびしていないcell lineの浸潤能の差を検討する予定である。
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