骨軟部腫瘍の吸引細胞診における術前診断-in situ hybridization,in situ PCRを用いての検討-

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09671476
• 研究機関: 新潟大学
• 研究代表者: 堀田 哲夫 新潟大学, 医学部, 助手 (00272815)
• キーワード: in situ hybridization / in situ PCR / 培養細胞 / 骨軟部腫瘍 / 吸引細胞診

研究概要

1. 骨軟部腫瘍の吸引細胞診
骨軟部腫瘍は間葉系由来であるため、従来、腫瘍細胞と宿主由来の反応性に出現する間葉系の細胞とを明確に鑑別することは困難を伴うことが多かった。また、吸引細胞診では、組織の構築が失われており、細胞一個一個の解析が必要なため診断には熟練を要した。今回、我々はヒト培養細胞の異種移植モデルにおいて非放射性同位元素のジゴキシゲニンを用いたin situ hybridization法により、骨軟部腫瘍由来の腫瘍細胞と宿主由来の反応性細胞を細胞レベルで明確に区別する方法を確立した。通常の研究室で簡便に行うことができ、細胞一個一個のレベルまで判定できるこの手法は、吸引細胞診に画期的な変革をもたらすものと考えられる。
2. 骨軟部腫瘍の組織由来についての検討
上述のin situ hybridization法により、骨軟部腫瘍のうち骨肉腫と悪性線維性組織球腫について、その組織由来について検討した。骨肉腫における骨形成細胞の由来を明らかにすることにより、骨肉腫の骨形成には3種類のタイプがあることを初めて明らかにした。また、悪性線維性組織球腫における組織球様細胞と多核巨細胞は、腫瘍細胞が産生するchemoattractant factorによって誘導される反応性細胞であることを遺伝子レベルではじめて明らかにした。
3. 吸引細胞におけるin situ hybridization、in situ PCRの手技の確立
滑膜肉腫、ユーイング肉腫には遺伝子の特異的な転座があることが知られている。我々は滑膜肉腫から新たな細胞株を作製し、この細胞株のcharactrizationを行っている。また、ユーイング肉腫から樹立された細胞株をヌードマウス皮下に移植し、ユーイング肉腫の腫瘍モデルを作製した。これらの腫瘍モデルを用いて、吸引採取した細胞のmRNA,DNAの至適保存条件、また、in situPCRに最適の標本作製方法について検討中である。これらのモデル実験をもとに臨床例への応用を検討している。

研究成果

• [文献書誌] Hatano H: "The mechanism of bone formation in human osteosarcoma analyzed by in situ hybridization." Transactions of the 43rd Annual Meeting Orthopedic Research Society.USA. 22. 319 (1997)
• [文献書誌] Hatano H: "Expression of Cbfa1 gene in human malignant tumors:A specific marker of osteoblastic tumor." Transactions of the 44th Annual Meeting Orthopedic Research Society.USA. 23. 564 (1998)
• [文献書誌] Hatano H: "Histiocyte-Like Cells in Human Malignant Fibrous Histiocytoma are Reactive Monocyte/Macrophage Lineage." Transactions of the 44th Annual Meeting Orthopedic Research Society.USA. 23. 984 (1998)
• [文献書誌] Hatano H: "The origin of histiocyte-like cells and multinucleated giant cells in malignant fibrous histiocytoma-Neoplastic or reactive?-" Transactions of the 45th Annual Meeting Orthopedic Research Society.USA. 24. 190 (1999)
• [文献書誌] Hatano H: "Origins of Bone-Forming Cells in Human Osteosarcomas Transplanted into Nude Mice-Which Cells Produce Bone,Human or Mice?-." Journal of Pathology. 185. 204-211 (1998)
• [文献書誌] Hatano H: "The origin of histiocyte-like cells and multinucleated giant cells in malignant fibrous histiocytoma-Neoplastic or reactive?-" Pathology International. 49. 14-22 (1999)