1997 年度実績報告書

排卵と活性酸素…生殖器における活性酸素関連遺伝子,排卵酵素遺伝子の制御…

研究課題

研究課題/領域番号	09671683
研究種目	基盤研究(C)
研究機関	岡山大学
研究代表者	佐々木順造岡山大学, 医学部, 教授 (30093686)
研究分担者	野村貴子岡山大学, 医学部, 助手 (20116437)
キーワード	in situ ハイブリダイゼーション法 / 排卵 / 活性酸素 / Mn-SOD / 排卵酵素 / 合成プローブ
研究概要	排卵現象における活性酸素の役割を検討する目的で、活性酸素関連遺伝子を中心に、いわゆる排卵酵素遺伝子や排卵現象に関与する様々な分子の遺伝子発現について、in situハイブリダイゼーション法を試みた。動物については、正常ラットおよびマウスのほか、アカタラセミアマウス、ヒポカタラセミアマウスなど、カタラーゼを欠損し、スーパーオキシドディスムターゼ(SOD)によって活性酸素からつくられる過酸化水素を処理できない遺伝子欠損のマウスを準備し、排卵誘発実験後、ビタミンE欠乏食実験後や発情周期各相に、卵巣を採取した。プローブについては、pGEM4Zベクターに組み込まれたcDNAよりジゴキシゲニン-UTP又は^<35>S-UTPを組み込んだSenseおよびAntisenseのプローブを作成したが、排卵酵素のcDNAは入手困難であったため、合成プローブの新しい作成法を試みた。この方法は、論文から得たセンスおよびアンチセンスの配列の両端にEcoR IおよびHind IIIを認識する配列をもつ、合計99-merの長さの合成DNAを得て、これをもとにセンスまたはアンチセンスプローブの合成用鋳型DNAを作成する方法である。最近ではEcoRI/HindIIIカットされた状態の配列で、5'リン酸化した2本の相補的な配列を持つ合成DNA(5'-AATTC--------------------A-3'と3'-G--------------------TTCGA-5)の凍結乾燥品を得て、同様の方法でプローブを作成している。多くの標識が挿入され、高感度での検出が可能となった。この方法により、Mn-SOD、コラゲナーゼなど必要なプローブを一部既に合成し、また、グルタチオンペルオキシダーゼ、カタラーゼ、プラスミノーゲンアクチベータ、カリクレイン等については合成の途中にある。

研究成果
(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] 佐々木順造: "ラット卵巣におけるMn-SODmRNAの発現" Mebio. 14・1. 115-118 (1997)
[文献書誌] Hanada,H.: "Do reactive oxygen species underlie the mechanism of apoptosis in the tadpole tail ?" Free Radical Biology and Medicine. 23・2. 294-301 (1997)
[文献書誌] Futami,J.: "Tissue-specific expression of pancreatic-type RNases and RNase inhibitor in humans." DNA and Cell Biology. 16・4. 413-419 (1997)
[文献書誌] Yamamoto,H.: "uetrastructural and histochemical changes and apoptosis of inner enamel epithelium in nat enamel-free area." J.Craniofacial. Genetics and Developmental Biolgy. (in press). (1998)
[文献書誌] Yamamoto,H.: "Characterization of the inner enamel opithelium in the enamel-free area based on the ability to secrete enamel protein demonstrated by in situ hybridization and immunohistochemistry." Acta Anat.(in press). (1998)
[文献書誌] Sasaki,J.: "Multiple-labeling of oligo nucleotide probes for in situ hybridization." Acta Histochem.Cytochem.(in press). (1998)
[文献書誌] 佐々木順造: "「フリーラジカルの臨床」排卵と活性酸素-生殖器における発現から見たMnSODの役割" 日本医学館, 117 (1997)
[文献書誌] 佐々木順造: "「電子顕微鏡基礎技術と応用1997-ナノ世界への道」Insitu ハイブリダイゼーション法" 学際企画, 240 (1997)

1997 年度 実績報告書

排卵と活性酸素…生殖器における活性酸素関連遺伝子,排卵酵素遺伝子の制御…

研究代表者

佐々木 順造 岡山大学, 医学部, 教授 (30093686)

研究成果

[文献書誌] 佐々木順造: "ラット卵巣におけるMn-SODmRNAの発現" Mebio. 14・1. 115-118 (1997)

[文献書誌] Hanada,H.: "Do reactive oxygen species underlie the mechanism of apoptosis in the tadpole tail ?" Free Radical Biology and Medicine. 23・2. 294-301 (1997)

[文献書誌] Futami,J.: "Tissue-specific expression of pancreatic-type RNases and RNase inhibitor in humans." DNA and Cell Biology. 16・4. 413-419 (1997)

[文献書誌] Yamamoto,H.: "uetrastructural and histochemical changes and apoptosis of inner enamel epithelium in nat enamel-free area." J.Craniofacial. Genetics and Developmental Biolgy. (in press). (1998)

[文献書誌] Yamamoto,H.: "Characterization of the inner enamel opithelium in the enamel-free area based on the ability to secrete enamel protein demonstrated by in situ hybridization and immunohistochemistry." Acta Anat.(in press). (1998)

[文献書誌] Sasaki,J.: "Multiple-labeling of oligo nucleotide probes for in situ hybridization." Acta Histochem.Cytochem.(in press). (1998)

[文献書誌] 佐々木順造: "「フリーラジカルの臨床」排卵と活性酸素-生殖器における発現から見たMnSODの役割" 日本医学館, 117 (1997)

[文献書誌] 佐々木順造: "「電子顕微鏡基礎技術と応用1997-ナノ世界への道」Insitu ハイブリダイゼーション法" 学際企画, 240 (1997)

1997 年度実績報告書

佐々木順造岡山大学, 医学部, 教授 (30093686)