| 研究概要 |
本実験は、(1)ラジカル消去剤であるsuperoxide dismutasse(SOD),glutathione(GSH)等を阻害不活化する事により癌細胞にアポトーシスを誘導させる事、(2)ラジカル増加によるアポトーシス誘導の生化学的機序を解明する事を目的とした。細胞は、アポトーシス実験に多用されているHL-60細胞を用いた。
_2ラジカルを消去する、SODの内、細胞質、核に存在するCu,Zx-SODの阻害には、銅キレータであるDiehthyldithiocarbamate(DDC)を使用した。
DDCの添加により、Cu,Zn-SODの活性は、用量依存的に低下を示した。それらの低下に伴い、FACscanにて測定した細胞内ラジカル量は増加を示した。DDC投予後の、細胞の形態的変化は、投与6時間以降から明らかなアポトーシス小体が観察された。これらの細胞からDNAを抽出し、アガロースゲル電気泳動を行うと、明らかなDNAladderパターンが確認できた。このDNAfragmentationは、DDCの用量依存的、時間依存的に増加を示した。このDDC誘導アポトーシスは、NACの投与により抑制された。またDDCのよるアポトーシス誘導時のglutahioneperoxidase(Gpx)活性の測定の結果、このアポトーシスには、Gpxは関与しないことが示唆された。以上の結果から、細胞内O_2-ラジカルの上昇に伴い、アポトーシスが誘導され、O_2-ラジカルは細胞障害性よりは、むしろシグナル伝達に関連している可能性が示唆された。
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