| 研究課題/領域番号 |
09671815
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
眼科学
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| 研究機関 | 慶應義塾大学 |
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研究代表者 |
大竹 雄一郎 慶応義塾大学, 医学部, 助手 (30233159)
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| 研究分担者 |
清水 信義 慶応義塾大学, 医学部, 教授 (50162706)
高柳 淳 慶応義塾大学, 医学部, 助手 (80245464)
真島 行彦 慶応義塾大学, 医学部, 助教授 (40157186)
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| 研究期間 (年度) |
1997 – 1998
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| キーワード | 悪性黒色腫 / 眼内腫瘍 / 遺伝子治療 / モノクローナル抗体 / 人工一本鎖抗体 / イムノジーン |
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| 研究概要 |
眼悪性黒色腫に対する遺伝誌治療を目指し、上皮増殖因子(EGF)レセプターと特異的なモノクローナル抗体(B4G7)を、ポリリジンを介してDNAと結合させた複合体(イムノージン)を利用して、EGFレセプター発現細胞に選択的に遺伝子を導入する方法を試みた。自殺誘導遺伝子(HSV-TK遺伝子または大腸菌CD遺伝子)を運ぶイムノジーンを、10^5cellレベルでEGFレセプターを発現している培養悪性黒色腫細胞(HMV-I、G361)に添加し、生存細胞を計測した。遺伝子導入のみでは殺細胞効果は認めなかったが、イムノジーンでの遺伝子導入により、GCVや5-FCに対する感受性が濃度依存的に亢進した。特に、HMV-I細胞では、CD導入/5-FC処理により90%以上に細胞が死滅し、少なくとも7日間細胞増殖を抑えた。さらに、この殺細胞効果は、Fab断片でまえ処理するとHSV-TK、CDともに抑制されたことからイムノジーンによる遺伝子導入がEGFレセプターを介することが確認された。
また、HMV-I細胞をCD/イムノージンあるいはTK/イムノージンと混合した後、ヌードマウス背部皮下に移植し、5-FCあるいはGCVを隔日にマウス腹腔内投与した。遺伝子導入のみ、5-FC、GCV投与単独では腫瘍は経時的に増殖したが、CD導入/5-FC処理およびTK導入/GCV処理では、約3週間にわたる顕著な腫瘍増殖抑制効果を認めた。すなわち、イムノージンによる実験的遺伝子治療が、in vutro及びex vivoにおいて有効であることが確認された。
一方、B4G7抗体遺伝子のcDNAをクローニングし、人工一本鎖(scFV)抗体の酵母での発現系を作製した。 一本鎖抗体 を用いたイムノジーンを用いることにより、偏平上皮癌細胞や悪性黒色細胞において、in vitroでの遺伝子導入が確認されている。現在scFv抗体大量精製方法および in vivoでの効果・安全性について、引き続き検討中である。
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