軟骨肉腫由来軟骨成長因子エコジェニン/CTGFのレセプターの分子クローニング

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09671893
• 研究機関: 岡山大学
• 研究代表者: 中西 徹 岡山大学, 歯学部, 助教授 (30243463)
• 研究分担者: 大山 和美 岡山大学, 歯学部, 教務員 (00253021) ; 服部 高子 岡山大学, 歯学部, 助手 (00228488) ; 滝川 正春 岡山大学, 歯学部, 教授 (20112063) ; 井上 美穂 岡山大学, 歯学部, 教務員 (20271059)
• キーワード: CTGF / プロテオグリカン / インテグリン / アフィニティークロマト / レセプター / チロシンキナーゼ / MAPキナーゼ

研究概要

(1)軟骨肉腫由来軟骨細胞株HCS-2/8に存在しCTGFと特異的に結合するレセプターのうち、低親和性のものはプロテオグリカンなどの細胞外基質であり、高親和性のものの一部はインテグリンなどの細胞接着因子であることが示唆された。
(2)HCS-2/8細胞の細胞膜画分および細胞質画分からそれぞれCTGF結合蛋白質を、CTGFを固定化したアフィニティークロマトグラフィーにより精製した。その結果、細胞膜画分からは34kDa,44kDa,66kDaの3種類、細胞質画分からは50kDaの各CTGF結合蛋白質が精製された。これらの発現量はCTGFの細胞刺激により変動したことから、CTGFの生理的作用に関連するレセプターを含む蛋白質であると考えられた。
(3)チロシンキナーゼ型レセプターに共通する遺伝子塩基配列をもとに縮重プライマーを作製し、RT-PCR法によってHCS-2/8細胞からチロシンキナーゼ型レセプター遺伝子断片をクローニングした。これらの塩基配列を調べた結果、既知のチロシンキナーゼ型レセプターに似た新しいレセプターをいくつか含んでいた。これらの遺伝子の一部の発現はCTGFの細胞刺激により変動し、さらにCTGF遺伝子を多く発現する細胞株にこれらのレセプターも多く発現していた。これらの結果は、クローニングしたチロシンキナーゼ型レセプター遺伝子断片にCTGFレセプター遺伝子が含まれる可能性があることを示した。
(4)各種シグナル伝達分子の阻害剤を用いた実験から、細胞へのCTGF刺激はMEK,ERKなどのMAPキナーゼ経路を介して細胞内に伝達されることがわかった。

研究成果

• [文献書誌] Kubota S.: "Involvement of cis-acting repressive element(s) in the 3'-untranslated region of human connective tissue growth factor gene"FEBS Lett.. 450. 84-88 (1999)
• [文献書誌] Kondo Y.: "Immunohistochemical localization of connective tissue growth factor in the rat central nervous system"Brain Res.. 834. 146-151 (1999)
• [文献書誌] Shimo T.: "Connective tissue growth factor induces the proliferation, migration and tube formation of vascular endothelial cells in vitro, and angiogenesis in vivo"J. Biochem.. 126. 137-145 (1999)
• [文献書誌] Mori T.: "Role and interaction of connective tissue growth factor with transforming growth factor-beta in persistent fibrosis: A mouse fibrosis model"J. Cell Physiol.. 181. 153-159 (1999)
• [文献書誌] Nakanishi T.: "Effects of CTGF/Hcs24, a product of a hypertrophic chondrocyte-specific gene, on the proliferation and differentiation of chondrocytes in culture"Endocrinol.. 141. 264-273 (1999)