| 研究概要 |
平成9年度から10年度までは,人リンパ球を使って血清型b抗原にポジティブに反応するハイブリドーマを作製し,そのハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体のイディオタイプの解析を試みた。しかし,得られた20クローンのヒト・マウスへテロハイブリドーマはいずれも血清型b抗原に対してポジティブな反応を示さなかった。平成11年度では,血清型b抗原に対するモノクローナル抗体を産生するマウスハイブリドーマについて一本鎖化可変部位断片(ScFv)を作製しそのイディオタイプの解析を試みた。まず,過去に我々が樹立したマウスハイブリドーマ(S5;血清型b抗原に特異的に反応,L2;A.actinomycetemcomitansのLPS部分に特異的に反応)の培養を開始した。これら2個のハイブリドーマからQuickPrep mRNA Purification KitによってmRNAを調製した。調製したmRNAから,マウスH鎖可変領域,L鎖可変領域に特異的なプライマーを使用したRT-PCRによって各領域に対するcDNAを増幅した。S5についてはL鎖が増幅されないため,ELISA法によるタイピングでλ鎖でないことを確認し数度,これらのcDNAをリンカーで結合してクローニングベクターに組み込みDNAシーケンスを行い,H鎖,L鎖の可変領域の遺伝子配列を明らかにした。本研究の当初の目的はヒト抗血清型b抗原抗体のイディオタイプ解析であったが,本研究においてえられたA.actinomycetemcomitansのLPS部分に特異的に反応する一本鎖抗体およびその遺伝子はヒトにおけるイディオタイプ解析において重要なツールとなると考える。
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