| 研究概要 |
1.三次元培養と単層培養のMMPs,TIMPs産生量の測定.
骨芽細胞様細胞MG-63(以下MG-63)に対して旭化成セルロースポーラスシートを用いた三次元培養と単層培養を行い,その培養上清中のMMP-1,MMP-2,TIMP-1,TIMP-2量を測定した.MMP-1に関しては14C-Collagen基質を用いたラジオイムノアッセイを行い,MMP-2,TIMP-1,TIMP-2に関してはELISA法を用いた.培地は測定24時間前に無血清培地に交換し,それぞれの測定値は各々のDNA量で除することによって補正した.その結果,MMP-1に関しては検出することができず,オートラジオグラフィーにて確認しても検出できなかったのでMG-63のMMP-1産生はほとんどないものと思われた.MMP-2に関しては三次元培養群が平均11.34μg,単層培養で平均8.21μg,TIMP-1がそれぞれ平均17.22μg,9.90μg.TIMP-2が4.19μg,2.47μgであり,いずれも三次元培養をしたほうが単層培養よりも良好な産生を示した.
2.MG-63の三次元培養におけるメカニカルストレスの影響
旭化成マイクロキャリアー(以下MC)0.25g(乾燥時)に対してMG-63を2.5×10^4個になるように調整し,播種した.これを5%CO_2,37℃気相下にて1週間培養した後,カルスターフラスコダブルアーム(柴田科学)にて,同じく5%CO_2,37℃気相下にて攪拌しながら24時間培養した.対照群は実験群と同量の培地を加え24時間静置した.その後,MCを回収し,平成10年度に報告した方法でtotalRNAを抽出・回収した.その結果,TIMP-1に関してわずかではあるがメカニカルストレスを加えた群の方がmRNAの発現が強かった.つまりメカニカルストレスによってTIMP-1の産生がmRNAレベルで促進されたことが示唆された.しかし,TIMP-2に関してはTIMP-1程の差は認められなかった.
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