| 研究概要 |
代表的な胆汁酸であるコール酸のコレステロールからの生合成はC-24/C-25位の炭素-炭素結合の切断反応を経て進行する。この反応の前駆体は3α-.7α,12α-トリヒドロキシコプロスタン-26-カルボン酸(THCA)であり、このもののコール酸への変換は脂肪酸のβ-酸化と類似したメカニズム、すなわちTHCA-CoA,24-エン-THCA-CoAおよび24-ヒドロキシ-THCA-CoAを生合成中間体としで進行すると考えられている。ところがC/C結合切断反応の直接的基質(鍵化合物)とみなされる24-オキソ-THCA-CoA(24-オキソ体)の生合成中間体としての役割はほとんど明らかにされていない。この点を検証することが本研究の目的である。
本研究が必要とする上記CoAエステル類および関連化合物は既知の方法で化学的に合成した。また酵素源としてはラット肝ホモジネートライトミトコンドリア分画およびHepG2を用いた。まず24-オキソ体そのものをこれらの酵素源から単離同定することを試みたが成功しなかった。そこで24-オキソ体がβ-ケトチオールエステル構造を有し、加水分解すると、定量的に27-ノル-3α,7α,12α-トリヒドロキシコプロスタン-24-オン(エチルケトン体)を与えることを利用することにした。すなわちTHCA-CoA,24-エン-THCA-CoAおよび24-ヒドロキシ-THCA-CoAをCoAおよびNAD+の存在下でインキュベート後加水分解し、トリメチルシリルエーテル誘導体としてGC-MS分析した。その結果いずれの場合もエチルケトン体が検出同定された。この結果は3種の基質がいずれも24-オキソ体に変換(それぞれ収率5%、19%および7%)されたことを示している。
ついで同様の手法で24-オキソ体を基質としてインキュベートした後、加水分解したものをp-ブロモフェナシルエステル誘導体化し、HPLC分析したところコール酸が同定された(変換収率12%)。
以上のようにして24-オキソ-THCA-CoAはコール酸生合成の最終中間体であることが確証された。
|
