|
p/CAFはp300/CBPと結合する因子として同定された転写共役因子であり、細胞周期の調節において重要な役割を果たしている。一方で、p/CAFはヒストンをアセチル化する酵素活性を有し、転写開始反応時においてクロマチンの構造を変化させ、基本転写装置のプロモーター領域への接近を容易にする働きを持っていると考えられている。本申請課題では、真核生物の転写調節機構の中でのp/CAFの役割を明らかにする事を目的として機能ドメインの解析を行っている。
これまでに、申請者はp/CAFの全領域にわたり欠損変異体を作成し、その転写活性化能をGAL4のDNA結合ドメインとの融合蛋白質として酵母および哺乳動物細胞(HeLa細胞)で発現させて調べた。その結果、酵母のシステムにおいて転写活性化ドメインとして中央付近の領域を同定した。この領域にはヒストンアセチル化酵素に特徴的なモチーフが認められ、ヒストンアセチル化と転写活性化の関連が考えられた。しかし、哺乳動物細胞を用いた時には、p/CAF全体においても、酵母において転写活性化ドメインとして同定した領域においても、転写活性化能は認められなかった。この酵母と哺乳動物細胞を用いた時の結果の違いは、酵母ではレポーター遺伝子として、染色体に組み込まれた遺伝子を用いているに対し、哺乳動物細胞においては染色体に組み込まれていないプラスミドの状態の遺伝子を用いている事に起因すると考えている。今後はレポーター遺伝子を染色体上に組み込んだ安定な遺伝子導入細胞を作成し、さらに解析を進めて行く予定である。
|
