Caco-2cellにおけるアポA-IVの合成・分泌機序について

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09672353
• 研究機関: 岐阜大学
• 研究代表者: 清島 満 岐阜大学, 医学部, 教授 (10171315)
• キーワード: アポA-IV / 脂肪酸 / CaCo-2cell

研究概要

ヒトアポA-IVは小腸粘膜細胞において特異的に合成され、脂肪の吸収に関与しているとされているが、その詳細は不明である。申請者はこれまで主としてラットを用いてこのアポ蛋白の合成機序を明らかにしてきたが、今回さらにアポA-IVの生理的機能を明らかにする目的でヒト大腸ガン由来のCaCo-2 cell (ヒト小腸粘膜細胞の機能を保持)を用いて、2種類の脂肪酸(oleic acidおよびcaprylic acid)によるアポA-IV合成に与える影響について検討した。
CaCo-2 cellをmambrane chamber付きのTranswell(Costar)を用いて検討した。細胞がconfluentになってからserum-free DMEMおよび上記2種類の脂肪酸を加えて比較した。3.0mMの長鎖脂肪酸であるOleic acid(C_<18:1>)と中鎖脂肪酸のCaprylic acid(C_<8:0>)を12mM Na taurocholate、2mM phosphatidyl cholineとともにculture wellに加えた。incubation timeは 6および24時間とし、lower wellに分泌されるリポ蛋白について検討した。C_<18:1>を負荷した場合TGは6時間で4倍、24時間で24倍増加し、C_<8:0>はそれぞれ1.3倍、10倍増加した。一方、6時間後の細胞内アポA-IVmRNAレベルをノーザンにて測定したところ、C_<18:1>はC_<8:0>に比べ有意に増加していた。この結果はラットにおけるin vivoの結果とは異なっていたが、現在medium中のアポA-IV濃度を測定するためにELISAを構築中である。

研究成果

• [文献書誌] H.Song,et al.: "II.-β and TNF-α suppress apolipoprotein (apo) E secretion and apo A-I expression in HepG2 cells." Cytokine. 10. 275-280 (1998)
• [文献書誌] H.Song,et al.: "Apo A-I and apo E concentrations in cerebrospinal fluid of patients with acute menigitis." Ann.Clin.Biochem.35. 408-414 (1998)
• [文献書誌] Y.Yano,et al.: "Stimulatory effects of apolipoprotein (a) and low-density lipoprotein on human umblical vein endothelial cell migration and proliferatio are partially modiated by fibroblast growth factor-2." Biochim.Biophys.Acta. 1393. 26-34 (1998)