SCIDマウス由来の培養細胞を用いた微量放射線用生物線量計の開発

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09680521
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 中島 裕夫 大阪大学, 医学部, 助手 (20237275)
• 研究分担者: 野村 大成 大阪大学, 医学部, 教授 (90089871)
• キーワード: SCID / 培養細胞 / マウス / 生物線量計 / DNA二重鎖切断 / DNA修復 / 微量放射線 / 潜在致死性損傷

研究概要

前年度の実験からSCIDマウス培養細胞が生物線量計として充分に利用できることが裏付けられ、terminal deoxynucleotidyl transfrase(TdTenzyme)を用いてDNA切断端の3′-OHを認識し、digoxigenin-nucleotide triphosphateを付加し、免疫蛍光染色を施して、細胞内DNA二重鎖切断箇所の可視化および定量する方法の確立を試みた。
しかしながら、TdTenzymeが大きすぎて細胞膜および核膜を自由に通過できないことが判明し、TdTenzymeが自由に通過でき、かつ、核内のDNAが溶出しない細胞膜マトリクスサイズが得られるような条件を設定し、二重鎖切断箇所の蛍光染色を再度試みたが蛍光シグナルは得られなかった。その後の追究でTdTenzymeの活性半減期が短く、付加されたdigoxigenin-nucleotide triphosphateも数十baseと概算され、少なくともシグナルとして検出するのに必要な400baseには程遠いものであり、蛍光シグナルとしてそれぞれの二重鎖切断箇所が検出できるほど充分にdigoxigenin-nucleotide triphosphateがDNA断端に付加されていないことがわかった。さらに、digoxigenin-nucleotide triphosphate鎖が長くなるに従い現れる立体構造的な問題が長鎖digoxigenin-nucleotide triphosphateの生成を阻害している可能性もでてきた。
digoxigenin-nucleotide triphosphate鎖長が短くとも蛍光シグナルを増強することによる検出感度の増幅を試みたが充分な蛍光シグナルは得られなかったことから、TdTenzymeでDNA二重鎖切断箇所にいかに400baseのdigoxigenin-nucleotide triphosphateを付加するかが今後の検討課題として残った。

研究成果

• [文献書誌] Nomura,T.,et al.: "Induction of cancer.actinic keratosis,and specific p53 mutation by UVB light in human skin maintained in severe commbined immunodeficient mice." Cancer Res.57. 2081-2084 (1997)
• [文献書誌] Kawaguchi,T.,et al.: "Consecutive maintenance of human solitary and hereditary colorectal polyps in SCID mice and K-ras mutations." Cancer Detection and Prevention. 21. 148-157 (1997)
• [文献書誌] Nakajima,H.,et al.: "Radionuclides carved on the annual rings^n of a tree near Chernobyl" Health Physics. 74. 265-267 (1998)
• [文献書誌] Li,L.,et al.: "Dose tate effectiveness and potentially lethal damage repair in normal and double strand break repair deficient murine cells by γ rays and 5-fluorouracil." Cancer Letters. 123. 227-323 (1998)
• [文献書誌] Fukuda,K,et al.: "Morphology and function of human benign tumors and normal thyroid tissues maintained in severe combined immunodeficient mice." Cancer Letters. 132. 153-158 (1998)