p53の変異による放射線感受性とシグナル伝達の変化

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09680528
• 研究機関: 長崎大学
• 研究代表者: 岡市 協生 長崎大学, 医学部, 助教授 (80124874)
• 研究分担者: 井原 誠 長崎大学, 医学部, 助手 (60175213) ; 奥村 寛 長崎大学, 医学部, 教授 (00073130)
• キーワード: p53 / Saos2 / 突然変異 / 変異部位 / 放射線感受性 / シグナル伝達 / アポトーシス / G1停止

研究概要

いくつかの突然変異したp53遺伝子を人工的に作成し、Saos-2細胞(p53遺伝子が欠失している骨肉腫細胞)に導入した。また、コントロールとして正常p53遺伝子をLacSwitchの系を用いて細胞に導入した。これらのp53遺伝子導入細胞の放射線感受性を測定したところ、正常p53遺伝子導入細胞では、放射線感受性が高くなった。また、143A、157H、273H変異細胞では、放射線抵抗性であったが、123A変異細胞では、放射線感受性が高くなった。このことより、p53遺伝子の変異部位によって放射線感受性が異なることが分かった。次に、放射線によるアポトーシス誘導をで調べた。放射線に感受性であった正常p53細胞と123A変異細胞では、放射線照射後のアポトーシスのラダーが観察されたが、放射線に抵抗性であった143A、157H、273H変異細胞ではラダーが見られなかった。さらに、ウエスタンブロット法でp53のタンパク量を調べると、正常p53細胞と123A変異細胞において放射線によるp53の蓄積が見られが、143A、175H、273H変異細胞では、放射線によるp53の蓄積が見られなかった。そこで、正常p53細胞と123A変異細胞で、放射線によるp53依存性のWaf-1の誘導を調べたところ正常p53細胞ではWaf-1の誘導が観察されたが、123A変異細胞では見られなかった。また、123A変異細胞では、G1停止が見られなかった。しかし、BaxとMDM2の誘導とBcl-2の減少は正常p53細胞と123A変異細胞共に観察された。このことより、細胞を放射線感受性にする123A変異は、Waf-1によるG1停止の誘導機能が失われているがBaxとBcl-2の調節によるアポトーシス誘導や、MDM2の誘導によるp53タンパク質の調節機能は持っている突然変異であることが分かった。

研究成果

• [文献書誌] Okaichi,K.: "Sensitivity to ionizing radiation in Saos-2 cells transfected with mutant p53 genes depends on the mutation position." J.Radiat.Res.,. 39. 111-118 (1998)
• [文献書誌] Wang,L.: "Sensitivity of anticancer drugs in Saos-2 cells transfected with mutant p53 varied with mutation point." Anticancer Research,. 18. 321-326 (1998)
• [文献書誌] Miyahara,h.: "Amplification of int-2 and Bcl-2 genes in squamous cell carcinoma of the larynx." Acta Otolaryngl,. 118. 763-768 (1998)
• [文献書誌] Ihara,M.: "Heat sensitivity of double-strand DNA-dependent protein kinase (DNA-PK) activity." Int.J.Radiat.Biol.(in press).
• [文献書誌] Ohnishi,T.: "Restoration of mutant TP53 to nomal TP53 function by glycerol as a chemical chaperone." Radiat.Res.(in press).
• [文献書誌] 岡市協生: "p53と発癌" 現代医療. 30巻. 1851-1857 (1998)
• [文献書誌] 岡市協生: "正常p53遺伝子の細胞への導入" 広島医学. 51巻. 429-431 (1998)
• [文献書誌] 岡市協生: "p53突然変異遺伝子の細胞への導入" 長崎医学会雑誌. 71巻. 348-351 (1996)