| 研究概要 |
1.レセプター刺激に伴うG蛋白質αサブユニットの二次構造変化:
レセプターと同様にG蛋白質を活性化できるマストパランとcompound48/80によって引起されるGi1αの二次構造の変化を円偏光二色性(CD)で解析した。マストパランとcompound48/80は何れもGi1αのヘリックス含量を減少させた。また、compound48/80によるGi1αの活性化のEC50と二次構造変化のEC50は何れも30μg/mlと等しかった。更に、CD測定条件下でGi1αは失活していない事が確認された。そこで、レセプター刺激によってαサブユニットのαヘリックス含量が減少し、その構造変化がGDP解離を促進している事がわかった。
D337,D341A Gi1αの二次構造変化と活性化:
αサブユニットのレセプター結合部位にあるα5ヘリックス中に存在する2つのアスパラギン酸(D337,D341)はβ2-β3ループに存在するリジン(K192)とイオンペアを形成しており、β2ストランドの先にはグアニンヌクレオチド結合部位が存在する。そこで「レセプター刺激によってα5ヘリックスの巻戻しが起り、その結果GDPの解離が促進される」と考えられる。この仮説を確認するために2つのアスパラギン酸をアラニンに置換した突然変異体(D337,D341A Gi1α)を作成した。この突然変異体はcompound48/80によってαヘリックス含量は減少したが、GDP解離の促進は起こらなかった。また、m2スカリンレセプターによっても活性化されなかった。これらの現象は上記の仮説を裏付けている。
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