1998 年度実績報告書

アテンウイルスベクターを用いたアミロイド蛋白質前駆体の機能と神経毒性に関する研究

研究課題

研究課題/領域番号	09680743
研究機関	大阪大学
研究代表者	植月太一大阪大学, 蛋白質研究所, 助手 (20260309)
研究分担者	斉藤泉東京大学, 医科学研究所, 助教授 (70158913)
キーワード	アテンウイルスベクター / アミロイド前駆体タンパク質 / ヒト胚性ガン細胞 / ラット海馬 / アポトーシス
研究概要	本研究では遺伝子導入強制発現するベクターとしてアデノウイルスベクターを用い、in vitro、in vivo条件下のニューロンに効率よく遺伝子導入する方法を確立し、その系を用いてアミロイド前駆体蛋白質(APP)のニューロンでの作用を研究した。研究材料として全長型APP695を普遍的で強力なCAGプロモーターによって発現するアデノウイルスベクターを作製した。培養細胞としてヒト分化ニューロンに極めて近い性質を持つ胚性ガン細胞NTera2(NT2細胞)由来のニューロンを用いた。分化したNT2細胞にAPP発現アデノウイルスベクター感染後の形態変化を観察したところ、感染後2日目まででは変化は見られなかったが3日目から突起を縮退させ、細胞体も膨潤するなどの変性が観察された。さらに5日目になるとAPPを多量に発現して細胞内に蓄積しているニューロンでは突起の縮退、細胞表面の不整化などの変性像が認められた。ニューロンの変性がどのような経路でもたらされるのかをさらに検討した。まず変性細胞の核の形態をヘキスト染色により顕微鏡下で覗察した。その結果、核の凝集、分裂化が観察された。さらにDNAの断片化が起きていることをタネル反応により確認した。以上の結果からAPP強制発現によるニューロン変性はアポトーシスであることが示された。現在アポトーシス直接関与している因子、カスパーゼの活性化が起きているのかどうかなどアボトーシスをもたらす経路を検討中である。

研究成果

(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Tominaga.K.: "Glutamate responsiveness enhanced in neurons expressing amyloid precursor protein." Neuro Report. 8. 2067-2072 (1997)
[文献書誌] Nishimura,I.: "Degeneration in Vivo of Rat Hippocampal Neurons by Wild-Type Alzheimer Amyloid Precursor Protein Overexpressed by Adenovirus-Mediated Gene Transfer." The Journal of Neuroscience. 18. 2387-2398 (1998)
[文献書誌] Nakada,Y.: "The human chromosomal gene for necdin, a neuronal growth suppressor, in the Prader-Willi syndrome deletion region." Gene. 213. 65-72 (1998)
[文献書誌] Sato,N.: "A Novel Strategy for Introducing Exogenous Bcl-2 into Neuronal Cells: The Cre/loxP System-Mediated Activation of Bcl-2 for Preventing Programmed Cell Death Using Recombinant Adenoviruses." Molecular and Cellular Neuroscience. 12. 65-78 (1998)
[文献書誌] 植月太一: "ウイルスベクターによる遺伝子導入と発現アデノウイルスベクター系ニューロサイエンス・ラボマニュアル・神経生物学のための遺伝子導入発現" シュプリンガーフェアラーク東京, 60-82 (1997)
[文献書誌] 植月太一: "胚性ガン細胞への遺伝子導入と発現一過性遺伝子導入法ニューロサイエンス・ラボマニュアル・神経生物学のための遺伝子導入発現研究法" シュプリンガーフェアラーク東京, 123-130 (1997)

1998 年度 実績報告書

アテンウイルスベクターを用いたアミロイド蛋白質前駆体の機能と神経毒性に関する研究

研究代表者

植月 太一 大阪大学, 蛋白質研究所, 助手 (20260309)

研究成果

[文献書誌] Tominaga.K.: "Glutamate responsiveness enhanced in neurons expressing amyloid precursor protein." Neuro Report. 8. 2067-2072 (1997)

[文献書誌] Nishimura,I.: "Degeneration in Vivo of Rat Hippocampal Neurons by Wild-Type Alzheimer Amyloid Precursor Protein Overexpressed by Adenovirus-Mediated Gene Transfer." The Journal of Neuroscience. 18. 2387-2398 (1998)

[文献書誌] Nakada,Y.: "The human chromosomal gene for necdin, a neuronal growth suppressor, in the Prader-Willi syndrome deletion region." Gene. 213. 65-72 (1998)

[文献書誌] Sato,N.: "A Novel Strategy for Introducing Exogenous Bcl-2 into Neuronal Cells: The Cre/loxP System-Mediated Activation of Bcl-2 for Preventing Programmed Cell Death Using Recombinant Adenoviruses." Molecular and Cellular Neuroscience. 12. 65-78 (1998)

[文献書誌] 植月太一: "ウイルスベクターによる遺伝子導入と発現 アデノウイルスベクター系ニューロサイエンス・ラボマニュアル・神経生物学のための遺伝子導入発現" シュプリンガーフェアラーク東京, 60-82 (1997)

[文献書誌] 植月太一: "胚性ガン細胞への遺伝子導入と発現 一過性遺伝子導入法 ニューロサイエンス・ラボマニュアル・神経生物学のための遺伝子導入発現研究法" シュプリンガーフェアラーク東京, 123-130 (1997)

1998 年度実績報告書

植月太一大阪大学, 蛋白質研究所, 助手 (20260309)

[文献書誌] 植月太一: "ウイルスベクターによる遺伝子導入と発現アデノウイルスベクター系ニューロサイエンス・ラボマニュアル・神経生物学のための遺伝子導入発現" シュプリンガーフェアラーク東京, 60-82 (1997)

[文献書誌] 植月太一: "胚性ガン細胞への遺伝子導入と発現一過性遺伝子導入法ニューロサイエンス・ラボマニュアル・神経生物学のための遺伝子導入発現研究法" シュプリンガーフェアラーク東京, 123-130 (1997)