Ca^<2+>/カルモデュリン依存性プロテインキナーゼIV欠損マウス作製と機能解析

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09770002
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 阪上 洋行 東北大学, 医学部, 助教授 (90261528)
• キーワード: カルシウム / 遺伝子発現 / 転写因子 / リン酸化 / プロテインキナーゼ / 核

研究概要

Ca^<2+>シグナル伝達機構に深く関与するCa^<2+>/カルモデュリン依存性プロテインキナーゼ(CaMキナーゼ)の神経細胞における生理的意義を解明すべく、平成10年度科学研究費申請計画に従い以下のような成果をあげた。
(1) 遺伝子欠損マウスの作成:129SVマウスのCaMキナーゼIVゲノムDNAを単離、構造解析を行い、ターゲッティングベクターを作製した。東京大学医科学研究所勝木教授との共同研究により相同組み換え体を含むES細胞の同定し、キメラマウスを作製に成功し、現在、機能解析のため、F1マウスの作成のため交配中である。
(2) CaMキナーゼIVの活性化機構の解析:近年、本酵素の活性化には上流活性化酵素に存在するCaMキナーゼキナーゼ(CaMKK)によるリン酸化が必須であることが明らかになってきた。申請者は本酵素の活性化機構を解明する一助としてCaMKKの2つの分子の遺伝子発現局在をin situハイブリダイゼーション法を用いて検討した。その結果、2つの分子種が神経系において異なる発現様式を示すことを明らかにし報告した(Mol.Brain Res.1998)。さらに2つの分子の機能の場を明らかにするため抗体を作成し、現在、免疫組織学的に2つの分子の細胞内局在を解析中である。
以上、申請した実験計画に従い、CaMキナーゼの分子多様性の神経細胞における生理的意義の解明のために着実に研究を展開している。

研究成果

• [文献書誌] H.Sakagami: "Localization of the mRNAs for two isoforms of Ca^<2+>/calmoeulin-dependent pretein kinase kiocses in the adult rat brain." Molecular Brain Research. 54. 311-315 (1998)
• [文献書誌] F.Ono: "A novel classII phosphcinesitide 3-kinase predminauntly expressed in the liver and its enhanced expression during liver degerenation" J.Biol.Chem.273. 7731-7736 (1998)
• [文献書誌] T.Abe: "Molecular characterization and tissue distribution of a new organic anion tranpotev subtyps(catp3)that trmports thyroid horrones and taurochalate and comporison inth catp2" J.Biol.Chem.273. 22395-22401 (1998)
• [文献書誌] S.Saito: "Lacalization of mRNAs for CDP-diacylglycerol synthase and phosphetidylinositol synthase in the brain and retura of developing and adult rats." Developmental Brain Research. 185. 139-146 (1998)
• [文献書誌] Y.Otsuka: "Differential localization of mRNAs for manuclian trps,presumptive capacitative calcium entry channels,in the adult mouse brain" Tohou J.Exp.Med.185. 139-146 (1998)
• [文献書誌] 阪上洋行: "Ca^<2+>/カルモデュリン依存性プロテインキナーゼIVに関する形態学的研究" 解剖学誌. 73. 9-12 (1998)
• [文献書誌] S.Yagihashi: "Dynamic Cells:Cell Biology of the 21st Century" ELSEVIER, 169 (1998)