血管内皮細胞の機械刺激受容機構の解明

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09770025
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 成瀬 恵治 名古屋大学, 医学部, 講師 (40252233)
• キーワード: 血管内皮細胞 / 機械受容 / チャネル / クローニング / メカノリセプター

研究概要

機械受容リセプターである機械受容チャネルのクローニングを目指した。研究実施計画に従い、いくつかのチャネルの種を通して保存されている領域に対する degenerate primerを作製し血管内皮細胞および心筋細胞に対してスクリーニングを行った。これまでのところ心筋細胞においてカルシウム依存性・ATP感受性の機械受容チャネルの部分的なシークエンスを確認した。
電気生理学的解析:トリ培養心筋細胞には5種類の機械受容チャネルが存在することを確認した。特に、コンダクタンスが200pSの機械受容チャネルについて解析を進めたところ、細胞内カルシウムに感受性を持ちサソリ毒キャリブドトキシンにより阻害される巨大コンダクタンス型カルシウム依存性カリウムチャネル(BK channel)であることが判明した(学会発表・論文投降中)。
分子生物学的解析:上記の機械受容チャネルのクロ一二ングを行った。(1)BK channelの保存領域に対するdegenerate primerを作製た。(2)PCRを行ったところ予想される分子量にPCR産物が増幅された。(3)PCR産物をTAクローニングしシークエンスを行ったところ既知の塩基配列と高い相同性を持つ部分を得ることができた。(4)培養心筋細胞からmRNAを抽出しcDNAライボラリーを作製した。(5)cCDNAライボラリーをλファージベクターに組込んだ。(6)現在、上記配列をプローブとしプラークハイブリダイゼーションを行っている。

研究成果

• [文献書誌] NARUSE,K.: "Involvement of SA channels in orienting response of calfued endothelial cells to cyclii stickl" Am.J.Physiol. (in press). (1998)
• [文献書誌] NARUSE,K.: "Stretih dependint tyrosin phosplxybtin reglation mopphlyat clyc of endothdid alls" Oncosene. (in press). (1998)
• [文献書誌] KATO,T.: "Up-regalectin of COX2 in response to aysls strta in Ruman by fibnflist alls" BBRC. (in press). (1998)
• [文献書誌] Suzuki,M.: "Up-regalectin of ortegrin B_3 expresin by aydin stnofa in human umb:1:d erlothl alls" BBRC. 239. 372-376 (1997)
• [文献書誌] Sokabe,M.: "Mechamtlanskluction and intiuallele Sojnaly Tnechanism of stnofe indiad remodely in endotholid alls" Heart Uessel. 12. 191-193 (1997)
• [文献書誌] Sokabe,M.: "Stretch actionted ion channels:Sinjle channel us,whole all report" Projr Cell Res. 6. 139-149 (1997)