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今年度は胸腺組織および胸腺腫瘍におけるCD5リガンドのクローニングに先立ち、まず胸腺癌症例で強く発現しているCD5分子そのものの塩基配列解析を施行した。対象は胸腺上皮性腫瘍32例で、内訳は胸腺癌9例、異型胸腺腫3例、胸腺腫18例、胸腺カルチノイド1例、胸腺過形成1例、胸腺脂肪腫1例である。-80℃に凍結保存した腫瘍組織からRNAを抽出し、SuperScript II reverse transcriptase(GIBCO)とoligo(dT)またはrandom hexamerを用いてcDNAを合成し、CD5 transcriptは3つのsegmentsに分けてPCR増幅した。対照にp53 transcriptも増幅した。PCR産物は2% agarose gelで泳動、目的のbandを切出・精製し、ABI 377 DNA sequencerでdRhodamine dye terminator kitと4つのプライマーを用いてCD5 coding regionの全長を直接シークエンスした。得られた突然変異はT-vector cloningとRFLPを追加して確認した。その結果、CD5は胸腺癌8例、異型胸腺種3例、胸腺腫18例の全てで増幅されたが、酵素抗体法でCD5陰性であった腺癌1例と胸腺カルチノイド1例では増幅されなかった。シークエンス解析の結果、胸腺癌8例のうち1例で2箇所に1塩基置換が見出された(codon 289 : GAG(Glu)>GAT(Asp) ; codon 422 : GCC(Ala)>GTC(Val))が、他症例は全て野生型であった。p53も直接シークエンスしたが、異型胸腺腫瘍1例に突然変異(codon 159(exon 5) : GCC(Ala)>TCC(Ser))を認めたが、胸腺癌は野生型であった。この検索結果は現在投稿準備中である。
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