| 研究概要 |
レトロウイルス複製過程の詳細な解析のために、宿主因子に焦点を絞り解析した。主に用いた実験系はウイルスへ基質を加え、ゲノムRNAのDNAへの逆転写を直接アッセイする系(endogenous reverse transcription assay,ERT)である。HIV-1へ対する異種細胞を用いた実験から、トロピズム決定における宿主topoisomerase Iの重要性が示唆された。この酵素以外にRNA heicase等を介し逆転写へ関与することが予想されるATP等ヌクレオチドをERTへ添加し、サザンブロットによって産生されたcDNAをアッセイし逆転写効率を調べた。またTopoisomerase Iのモノクロナール抗体を作成し、、スーパーコイルDNAへ対するリラクセイション活性及び上記ERT活性に対する影響を調べた。その結果ATP及びその非加水分解性のアナログATP-γSによって、濃度依存的に精製HIV-1ウイルスの逆転写効率が上昇することが判明した。またTopoisomerase Iの活性を抑制するモノクロナール抗体は上記ERTにおいてもcDNA合成を抑制した。Endogenous RTアッセイの結果より、ATPへ結合する因子によって逆転写効率が著名に上昇することが判明した。この系においてtopoisomerase Iの作用を抑制するモノクロナール抗体の一部は同時にERTの効率も抑えたことから、ATPの標的はウイルス中に含まれるtopoisomerase Iであることが強く示唆された。ATPによってHIV-1の逆転写が調節されていることが判明したが、この分子機構はウイルスへ取り込まれている宿主因子topoisomerase IとATPとの結合によりゲノムRNAの2次構造が解除されることによると考えられた。
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