| 研究概要 |
細菌逆転写酵素は,multicopy single-stranded DNA(msDNA)と呼ばれるRNA-DNA複合体の合成に必須の酵素であり,細胞内で安定な一本鎖DNAを合成可能な唯一の系として知られている.この系を利用することによって細胞内でアンチセンスDNAなどを合成し,新たな遺伝子発現制御系を構築することが可能である。従来より用いられているアンチセンスRNAによる遺伝子発現制御系は大量のRNAを発現させる必要があり効率が悪いが,アンチセンスDNAを利用した場合は,細胞内に存在するリボヌクレアーゼHが標的mRNAを分解可能であるためアンチセンスRNAより少量で効率良い遺伝子の発現抑制を行うことができる.
本研究では,大腸菌の主要な多剤耐性遺伝子であるacrABに対するアンチセンスDNAを細胞内で合成し,遺伝子の発現抑制を行うことによって大腸菌を薬剤感受性にするモデル実験を行った.cDNA合成の鋳型とプライマーに相当するRNAおよび逆転写酵素遺伝子を含むプラスミドを作製し,アンチセンスDNA(anti-acrA)合成のためのオリゴヌクレオチドを鋳型領域に挿入した.そして,野生型の大腸菌に導入し,それらの発現を誘導したところアンチセンスDNAを発現している株は,薬剤感受性を示した.それに対して,センスDNAを発現しているものやベクターのみでは薬剤耐性のままであった.
今後,このアンチセンスDNAの細胞内発現系は,効率良い新たな遺伝子発現制御系として真核生物にも応用可能であると考えている.
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