慢性関節リウマチの病因に関与するT細胞の解析

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09770334
• 研究機関: 聖マリアンナ医科大学
• 研究代表者: 本郷 佳世 聖マリアンナ医科大学, 難病治療研究センター, 助手 (80288208)
• キーワード: 慢性関節リウマチ / T細胞クローン / T細胞レセプター / II型コラーゲン / RT-PCR-SSCP法

研究概要

【目的】慢性関節リウマチ(RA)の病因に関与する可能性のある自己抗原反応性T細胞をクローンレベルで検出し、それらのT細胞レセプター(TCR)遺伝子を解析する。【方法】RA患者末梢血よりT細胞を分離し、これをRAの仮想自己抗原であるヒトII型コラーゲン(IIC)と試験管内にて共培養し、反応増殖するクローンを得た。これらのT細胞クローンよりRNAを抽出後、T細胞レセプター(TCR)遺伝子BV各ファミリーおよびBC領域に特異的なプライマーを用いてRT-PCR法を行い、TCRβ鎖V-D-J領域遺伝子を増幅した。これらのDNAを熱変性させて1本鎖とし、SSCP法により展開した。以上により、塩基配列の違いに基づき、IICに反応して集積するT細胞クローンを検出した。さらに、これらのクローンと生体内(病変部)に集積しているクローンとを比較し、ジデオキシ法によりTCR遺伝子配列を解析した。【結果と考察】RA患者病変部にはT細胞がオリゴクローナルに集積しており、その少なくとも一部は、自己抗原であるIICを認識して増殖していることが示された。さらに、IICに反応するクローンは、病変局所に集積しているT細胞クローンの一部と同一のTCR遺伝子塩基配列を有することが確認された。このような解析により、RAの関節病変に関与するT細胞およびその抗原特異性を同定し、RAの病因解明および特異的治療の開発の可能性が開けるものと考えられた。

研究成果

• [文献書誌] Mato T,Masuko K,Misaki Y,Hirose N,Ito K,et al.: "Correlation of clonal T cell expansion with disease activity in systemic lupus erythematosus" Int Immunol. 9. 547-554 (1997)
• [文献書誌] Masuko-Hongo K,Sekine T,Ueda S,Kobata T,et al.: "Long term persistent accumulation of CD8+T cells in synovial fluid of rheumatoid arthritis" Ann Rheum Dis. 56. 613-621 (1997)
• [文献書誌] kato T,Kurokawa M,Masuko-Hongo K,et al.: "T cell clonality in synovial fluid of a patient with rheumatoid arthritis:persistent but fluctuant oligoclonal T cell expansions" J Immunol. 159. 5143-5149 (1997)
• [文献書誌] Kobata T,Takasaki K,Asahara H,Hong NM,et al.: "Apoptosis with FasL+cell infiltration in the periphery and thymus of corrected autoimmune mice" Immunology.92. 206-213 (1997)
• [文献書誌] Masuko-Hongo K,Kato T,Suzuki S,Sekine T,et al.: "Frequent clonal expansion of peripheral T cells in patients with autoimmune diseases:a novel detecting system possibly applicable to laboratory examination" J Clin Lab Anal. (in press).
• [文献書誌] Suzuki S,Masuko-Hongo K,Hoeger TA,Hong NM,et al.: "Contribution of the T cell receptor BJ gene to recognition of the P91A tumor antigen in DBA/2 mice" Cancer Immunol Immunother. (in press).