0-2A前駆細胞,不死化中脳アストロサイト由来ドパミン神経栄養因子のクローニング

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09770444
• 研究機関: 鳥取大学
• 研究代表者: 竹島 多賀夫 鳥取大学, 医学部・付属病院, 講師 (20206973)
• キーワード: 神経栄養因子 / グリア / differential display / 0-2A前駆細胞 / アストロサイト / パーキンソン病 / ドパミン神経

研究概要

ラット中枢神経由来0-2A前駆細胞,オリゴデンドロサイト,中脳,線条体,大脳皮質,小脳由来I型アストロサイトを大量培養し培養上清及びmRNAを回収しdifferential displayを行いドパミン神経に対する神経栄養因子の候補遺伝子断片を得た.
0-2A前駆細胞はラット胎生16日の線条体より我々が開発したbFGF刺激法にて純度95%の0-2A前駆細胞を約1.0x10^9個得たのち,GTC法にてRNAを回収し,poly-Aカラムを用いてmRNAを精製した.オリゴデンドロサイトは0-2A前駆細胞をreplateし,PDGF刺激により分化誘導して得た.I型アストロサイトは,胎生16〜18日ラット脳より中脳,線条体,大脳皮質,小脳を切り出し,血清培地で培養し振盪法により精製した.各部位より約8.0x10^8個のI型アストロサイトを得た.オリゴデンドロサイト,各種I型アルストロサイトのmRNAを0-2A細胞と同様の方法で得た.また,培養上清のドパミン神経栄養効果をmicroisland法を用いて検討した.mRNAの逆転写により得たcDNAを6種類のプライマーセットを用いてdifferential displayを行った.0-2A前駆細胞で発現しオリゴデンドロサイトに分化すると消失するバンドで,I型アストロサイトでは発現していないバンドを切り出しDNAを回収した.再度PCR増幅を行い,確認後にオートシーケンサにより塩基配列を決定した.遺伝子データベースによりホモロジー検索を行った.現在18個の遺伝子断片について検討中である.これらの遺伝子断片において今後の検討の優先順位を決定し,平成10年度に全長DNAのクローニングを行う予定である.

研究成果

• [文献書誌] Takashima T: "Robust expansion of E12 mesencephalic dopaminergic neurons in culture." Soc.Neurosci.Abs.23. 593-593 (1997)
• [文献書誌] Takashima T: "Acrophase amplitude of ambulatory blood pressure decreases in migraineurs." Headache. 37. 577-582 (1997)
• [文献書誌] Commissiong JW,: "Effects of transforming growth factors on dopaminergic neurons in culture." Neurochemistry International. 30. 393-399 (1997)
• [文献書誌] Commissiong JW.: "A type-1 astrocyte cell line of mesencephalic origin(VM-CL2):Source of a potent dopaminergic neurotrophic factor." Soc.Neurosci.Abs.23. 1939-1939 (1997)
• [文献書誌] Mishima K,: "A<10 kilodalton fraction of cerebrospinal fluid from patients with parkinson's disease decreases the survival of rat mesencephalic dopaminergic neurons in culture." Yonago Acta Medica. 40. 53-61 (1997)
• [文献書誌] Mishima K,: "Platelet ionized magnesium,cyclic AMP, and cyclic GMP levels in migraine and tension type headache." Headache.
• [文献書誌] 37. 561-564 (1997)