アルツハイマー病脳のアミアロイドβ蛋白沈着阻害過程に関する分子生物学的研究

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09770750
• 研究機関: 札幌医科大学
• 研究代表者: 続 佳代 札幌医科大学, 医学部, 助手 (60207420)
• キーワード: アルツハイマー病 / アミロイドβ蛋白 / トランスサイレチン / sequestrating蛋白 / sequestration機構 / immunoprecipitation / in vitro binding assay

研究概要

これまで、アミロイドβ蛋白(Aβ)に結合するsequestrating蛋白のAβ凝集、沈着過程における役割を解明するために、ヒト剖検腎を対象に免疫病理学的、および生化学的検討を加えてきた。ヒト腎臓においてトランスサイレチン(TTR)がsequestrating蛋白として、Aβの凝集、沈着を阻害している可能性を示唆する結果が得られた。本年度は各Aβ分子種とTTRの関係を明らかにするために生化学的検討を加え、以下の結果が得られた。
1) 免疫沈降:腎臓内でTTRとAβが結合して存在するかどうかを明らかにするために、免疫病理学的にAβ、TTRの存在が確認された凍結腎より遠心法にて粗抽出液を作成した。ヒト腎では分子量約15kDaのmonomerと分子量約35kDaのdimerのTTRが検出された。各抗体結合Sepharose 4Bにて免疫沈降を行うとBC42抗体で吸着・溶出された成分にはTTR-monomer、TTR-dimerのいずれもが検出されたが、BC40抗体ではいずれも微量しか免疫沈降されなかった。腎臓内のTTRにはAβ42が選択的に結合していることが明らかとなった。
2) in vitro binding assay:免疫沈降において見られた所見を確認するために、さらにin vitroにおける各Aβ分子種とTTRの結合について検討を加えた。AβとTTRの反応産物を電気泳動すると、Aβ、TTR-monomer、およびTTR-dimerが染色された。Aβ42とTTRを反応させたときには、TTRにAβ42が結合した反応産物が検出されたが、Aβ40とTTRを反応させたときには、この結合物は認められなかった。
3) in vitro overlay binding assay:膜上のAβ40、Aβ42にTTRを反応させると、TTRはAβ42に結合しやすかった。
以上の結果よりTTRはin vivo、in vitroにおいて、より不溶型Aβ42に選択的に結合し、Aβ42はsequestrationされている可能性が示唆された。現在、培養腎細胞のcell lysateを用いて、各Aβ分子種に結合している蛋白の同定を試みている。

研究成果

• [文献書誌] Hayashi Y, Fukatsu,R, Tsuzuki K, et al: "Evidence for presenilin-1 involvement in amyloid angiopathy in the Alzheimer's disease-affected brain" Brain Research. 789. 307-314 (1998)
• [文献書誌] 今井浩三、続 佳代: "Aβ沈着阻害(sequestration)機構-腎における免疫病理学的検討-" 厚生省特定疾患代謝系疾患調査研究班アミロイドーシス分科会研究報告書. 75-79 (1998)
• [文献書誌] Tsuzuki K et al: "Sequestration mechanism for amyloid β play a role in the kidney" Society for Neuroscience Abstracts. 282.20 (1998)
• [文献書誌] Sasaki N et al: "Advances glycation end products involved in Alzheimer's disease and other neurodegenerative disease" American Journal of Pathology. 153. 1149-1155 (1998)
• [文献書誌] Sasaki N et al: "Immunohistrochemcal localization advances glycation end products in granulovacular degeneration" Society for Neuroscience Abstracts. 333.2 (1998)
• [文献書誌] 続 佳代、深津 亮: "Ab沈着阻害(Sequestration)機構に関する研究-ヒト腎臓における免疫病理学的、および生化学的検討-" Neuropathology. 18. (1998)