GAPジャンクションを介した多細胞間情報伝達による視床下部ホルモン分泌制御機構-神経内分泌系モデルを用いて-

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09770787
• 研究機関: 神戸大学
• 研究代表者: 重吉 康史 神戸大学, 医学部, 助手 (20275192)
• キーワード: コネクシン / 視床下部 / ラット / ギャップ結合

研究概要

新たな神経系特に視床下部に発現するコネクシンを検索するために、ラット視床下部より、mRNAを採取し、逆転写酵素にてcDNAを作成した。すなわち、J-AHaefligerらの方法に新しいコネクシン分子のcDNA配列を加味してコネクシン分子においてその塩基配列がよく保存されている膜貫通領域にてdegenerateprimerを作成した。PCRにてP32-CTPの存在下において増幅されたフラグメントをポリアクリルアミドゲルに泳動してそこに現われたDNAのバンドを切り出した。切り出されたバンドから再びPCRをおこなってDNAを回収しプラスミドベクターにサブクローンして、おのおののバンドについてクローンを採取して塩基配列を解析した。我々は上記の実験によって新規のコネクシンを得たが、その新規コネクシンについて、in situ hybridization,Northern hybridizationを用いて、全身の臓器について検索した。すると中枢神経系に特に強い発現を認めた。この新規コネクシンはコネクシン26にもっとも高い相同性を持っていた。その後、Dahlらがマウスの新規コネクシン(コネクシン30)をクローニングしたが、我々のクローニングしたクローンと96%の相同性を持ち、マウスの相同遺伝子であると考えられた。このcDNA断片を用いてラット脳より作成したファージcDNAライブラリーをその後検索した。

研究成果

• [文献書誌] Shigeyoshi,Y.et al.: "Lesion-induced neuronal nitric oxide synthase in purkinje cells of the rat cerebellar cortex : Hisfochemical and in sin hybridization study" Mol.Brain Res. 44. 229-37 (1997)
• [文献書誌] Tanaka,M., Matsuda,T., Shigeyoshi,Y. et al.: "Peptide expression in GABAergic neurous in rat suprachiasmatic nucleus incomparison with other forebrain structures : A double labeling in sitn hybridzation study" J.Histochem.Cytochem. 45. 1231-1237 (1997)
• [文献書誌] Ban,Y., Shugeyoshi,Y., Okamura,H.et al.: "Development of vasoactive intestinal peptide mRNA Rhythm in the rat suprachiasmatic nude us." J.Neurosci. 17. 3920-3931 (1997)
• [文献書誌] Yasojima,K.et al.: "Cloning of human and mouse cDNAs on coding novel zincfinger proteius expressed in cerebellum and hippocampus." Biochem.Biophys.Res.Commun.231. 481-487 (1997)
• [文献書誌] Shigeyoshi,Y.et al.: "Co-localization of prepro sema Tostatin mRNA and preprotachykiuin A mRNA in neurons of the rat suprachiasmatic nucleus." Mol.Brain.Res.48. 159-163
• [文献書誌] Tei,H., Okamura,H., Shigeyoshi,Y.et al.: "Circadian oscillation of a mammalian homology of the Drosophila Preriod gene" Nature. 389. 512-516 (1997)