| 研究概要 |
1)すでにクローニングされているラットflt-1,KDRのシークエンスを検討し、その上流域にβ-galactosidase活性を組み込んだcDNAを合成した。市販のcationic liposomeとこのcDNAを反応させ、混合物を作製した。
2)150〜200gの雄生SDラットを工-テル麻酔下に開腹し、腎門部を露出させ、腎静脈に可逆性の血管結紮器をかけると同時に腎動脈から、上述のcationic liposome-cDNA混合物をmicroinjectorを用いて、注入し、軽く圧迫止血し、腎臓内の血流を停滞させる。この際、腎臓の組織に虚血による組織障害が出現しないように、生理食塩水を注入する予備実験を何度か行い、その条件を決定した。また、cationic liposome-cDNA混合物の混合の割合、注入量も条件を変え検討した。
3)cationc liposome-cDNA混合物を注入後、ラットを開腹し、12時間後、24時間後、2日後、3日後、4日後、1週間後にラットより、腎臓、肝臓、肺を摘出し、凍結切片を用いて、β-galactosidase活性の免疫染色を行い、切片あたり陽性糸球体数を数え、導入効率を算定する。現在各種条件で、導入効率を算定し、比較するところまで到達している。
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