1997 年度実績報告書

伸展刺激に対する培養メサンギウム細胞の認識機構と細胞内シグナル伝達系の検討

研究課題

研究課題/領域番号	09770858
研究機関	聖マリアンナ医科大学
研究代表者	近藤聡聖マリアンナ医科大学, 医学部, 助手 (10277981)
研究分担者	安田隆聖マリアンナ医科大学, 医学部, 助手 (70220150)
キーワード	糸球体内高血圧 / 伸展 / 弛緩 / メサンギウム細胞 / 細胞内情報伝達 / チロシンリン酸化 / P125^<FAK> / paxillin / アクチンストレスファイバー
研究概要	慢性腎不全の進展機序の一つとして、糸球体内高血圧によるメサンギウム細胞(MCs)の伸展が提唱されている。我々はこの進展刺激がどのような機構で細胞内に伝達され、細胞の変化として発現されるのかについて明らかにする目的で、培養MCsを周期的に伸展させ、細胞に生じる変化について検討した。先ず細胞内シグナル伝達系について、細胞を伸展後、細胞内で生じるチロシンリン酸化について検討した。細胞骨格であるストレスファイバーの細胞膜側末端に形成される焦点接着(Focal adhesion)に局在するチロシンキナーゼであるfocal sdhesion kinase(P125^<FAK>)と、その基質であるpaxillinのリン酸化をウェスタンブロット法で検討し、さらに、そのリン酸化に関与するシグナル伝達系を調べるため、インヒビター添加後のリン酸化抑制を検討した。その結果、P125^<FAK>・paxillinはMCsの伸展後、10分から15分後にリン酸化され、それらのリン酸化はGF109203X,BAPTA-AMにより抑制された。つまり、伸展刺激のシグナル伝達にはプロテインキナーゼ(PKC)およびカルシウムイオンが関与していることが理解された。続いて機械的に伸展させたMCs内のアクチンストレスファイバーをFITC-phalloidinで染色し、伸展刺激によるアクチンストレスファイバー合成を検討した。その結果、細胞伸展後5分から10分後にストレスファイバー合成が増加することが証明された。続いてこの実験にもシグナル伝達系のインヒビターを添加し、アクチンストレスファイバー合成の抑制について検討した。その結果、PKCおよびカルシウムイオンが関与していることが同様に示唆された。現在カルシウムイオンの細胞内動員経路を確認するため、voltage operated calcium channelインヒビターであるニフェジピンとstress-activated channelインヒビターである塩化ガドリニウムを添加し、伸展実験を行っている。

研究成果

(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Harris RC, Kondo S, and Yasuda T: "Mechanical stress-cell function relationships in renal cells." Experimental Nephrology. 5. 263-270 (1997)
[文献書誌] Kondo S, Yasuda T, et al.: "Involvement of calcium and protein kinase C in stress fiber formation by cycllcal stretch/relaxation in cuitured rat mesangial cells." Journal of the American Society of Nephrology. 8. 441A (1997)
[文献書誌] Takemuta T, Kondo S, et al.: "The membrane-bound form of heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor promotes survival of cultured renal epitheiial cells." Journal of Biological Chemistry. 272. 31036-31042 (1997)
[文献書誌] Yasuda T, Kondo S, Hommma T, and Harris RC: "Regulation of extravellular matrix by mechanical stress in rat glomrular" Journal of Clinical Investigation. 98・9. 1991-2000 (1996)
[文献書誌] T,Yasuda, Y.Kohara, T.Usui, S.Kondo, et al.: "Glycated type IV collagen induces TGF-b expression and extracellular" Journal of the American Society of Nephrology. 7・9. 1880 (1996)
[文献書誌] 小原康伸, 安田隆, 近藤聡, 管沢正明ら: "非酵素的糖化IV型コラーゲンがメサンギウム細胞細胞外マトリックス産生能およびマトリックス成分間相互作用に及ぼす影響" 腎不全. 8・1. 43-48 (1996)

1997 年度 実績報告書

伸展刺激に対する培養メサンギウム細胞の認識機構と細胞内シグナル伝達系の検討

研究代表者

近藤 聡 聖マリアンナ医科大学, 医学部, 助手 (10277981)

研究成果

[文献書誌] Harris RC, Kondo S, and Yasuda T: "Mechanical stress-cell function relationships in renal cells." Experimental Nephrology. 5. 263-270 (1997)

[文献書誌] Kondo S, Yasuda T, et al.: "Involvement of calcium and protein kinase C in stress fiber formation by cycllcal stretch/relaxation in cuitured rat mesangial cells." Journal of the American Society of Nephrology. 8. 441A (1997)

[文献書誌] Takemuta T, Kondo S, et al.: "The membrane-bound form of heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor promotes survival of cultured renal epitheiial cells." Journal of Biological Chemistry. 272. 31036-31042 (1997)

[文献書誌] Yasuda T, Kondo S, Hommma T, and Harris RC: "Regulation of extravellular matrix by mechanical stress in rat glomrular" Journal of Clinical Investigation. 98・9. 1991-2000 (1996)

[文献書誌] T,Yasuda, Y.Kohara, T.Usui, S.Kondo, et al.: "Glycated type IV collagen induces TGF-b expression and extracellular" Journal of the American Society of Nephrology. 7・9. 1880 (1996)

[文献書誌] 小原康伸, 安田 隆, 近藤聡, 管沢正明ら: "非酵素的糖化IV型コラーゲンがメサンギウム細胞細胞外マトリックス産生能およびマトリックス成分間相互作用に及ぼす影響" 腎不全. 8・1. 43-48 (1996)

1997 年度実績報告書

近藤聡聖マリアンナ医科大学, 医学部, 助手 (10277981)

[文献書誌] 小原康伸, 安田隆, 近藤聡, 管沢正明ら: "非酵素的糖化IV型コラーゲンがメサンギウム細胞細胞外マトリックス産生能およびマトリックス成分間相互作用に及ぼす影響" 腎不全. 8・1. 43-48 (1996)