抗リン酸化抗体の利用による、細胞質分裂期に分裂溝近傍で活性化するキナーゼの同定

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09780589
• 研究機関: 愛知県がんセンター
• 研究代表者: 小迫 英尊 愛知県がんセンター, 生化学部, 研究員 (10291171)
• キーワード: CFキナーゼ / Rhoキナーゼ

研究概要

我々はグリア細胞の中間径フィラメント構成蛋白質であるグリア線維酸性蛋白質(GFAP)のリン酸化状態を特異的に認識する抗体群を用いることで、細胞分裂後期および終期に分裂溝の近傍でのみGFAPのSer-13およびSer-34のリン酸化が起こることをこれまでに報告してきた。本年度の研究で、これらのリン酸化を担うプロテインキナーゼ、、CFキナーゼ(Cleavage Furrow Kinase)の同定を試みた。GFAPのSer-8、Ser-13およびSer-34のリン酸化状態を特異的に認識するモノクローナル抗体、YC10、KT13およびKT34を用いてヒトグリオーマ細胞(U251)を免疫染色したところ、Ser-8のリン酸化は分裂前期および中期に細胞質全体で起こり、Ser-13およびSer-34のリン酸化は分裂後期および終期に分裂溝の近傍でのみ起こっていた。共焦点レーザー顕微鏡による観察の結果、分裂溝を取り巻くリング状の染色が認められた。さらにCFキナーゼの分子同定を進め、このCFキナーゼ活性が低分子量GTP結合蛋白質Rhoによって制御されるRhoキナーゼである可能性を示唆するいくつかの知見を得た。

研究成果

• [文献書誌] Matsuzawa,K.: "Possible regulation of intermediate filament proteins by Rho-binding kinases." in Intermediate Filaments (Subcellular Biochemistry),eds.by H.Hermann and J.R.Harris,Plenum Publishing Corp.(in press).
• [文献書誌] Kosako,H.: "Phosphorylation of glial fibrillary acidic protein at the same sites by cleavage furrow kinase and Rho-associated kinase." J.Biol.Chem.272. 10333-10336 (1997)
• [文献書誌] Matsuzawa,K.: "Domain specific phosphorylation of vimentin and glial fibrillary acidic protein by PKN." Biochem.Biophys.Res.Commun.234. 621-625 (1997)