1998 年度実績報告書

血管内皮細胞の傷害性刺激に伴って発現量が増加する新規遺伝子産物RTPの機能探索

研究課題

研究課題/領域番号	09780590
研究機関	国立循環器病センター
研究代表者	小亀浩市国立循環器病センター研究所, 病因部, 室員 (40270730)
キーワード	血管内皮細胞 / ホモシステイン / リゾフォスファチジルコリン / 血栓症 / 動脈硬化 / 遺伝子発現 / RTP / 細胞傷害
研究概要	動脈硬化や血栓症には、血管内皮傷害が大きく関与している。最近我々は、ヒト血管内皮細胞において、内皮傷害誘導物質として知られるホモシステインと動脈硬化促進物質として知られるリゾフォスファチジルコリンで共通に発現誘導される未知遺伝子1種を発見した。この遺伝子は新規蛋白質(RTPと命名)をコードしているが、その生理機能は不明である。そこで本研究では、機能解明を最終目的として設定し、RTPの生物学的諸性質を解析した。(1) RTP特異的抗体の作成とそれを用いた解祈まず、大腸菌に発現させたRTP-GST融合蛋白質でウサギを免疫し、RTP特異的抗体を作成した。ウェスタンブロット解析を行った結果、RTPは約47kDa蛋白質であり、ホモシステイン刺激した細胞での発現量増加が確認された。さらに、RTPは培養細胞の細胞質に局在することが判明した。この存在様式は細胞の刺激受容に依存せず、RTPは恒常的に細胞質全体に分布することが示唆された。(2) RTPのリン酸化抗体を用いた解析から、RTPはリン酸化されていることを示唆するデータを得た。これを検証し、プロテインキナーゼAがRTPを生理的基質とすること、他のキナーゼも関与することを明らかにした。(3) RTP相互作用蛋白質の探索RTPと相互作用する蛋白質を探索するため、Yeast 2-Hybrid Systemを行った。RTP発現量の多い組織である腎臓のcDNAライブラリー1.1×10^7クローンをスクリーニングした結果、1陽性クローンが得られた。現在、その解析を進めている。(4) RTP発現と病態との関連免疫組織化学的解析から、RTPは腎臓の近位尿細管や小腸絨毛で著しく発現していることがわかった。そこで、種々の病態を示す腎臓を正常腎臓と比較し、病変悪化に伴ってRTP量が増加することを見出した。以上の成果から、未だRTPの機能解明という目標には達していないものの、RTPに関する多くの貴重な知見が得られた。なお、本研究の一部を記述した論文をJ.Biol.Chem.誌に投稿し、現在再審査を受けているところである。

研究成果

(10件)

すべてその他

すべて文献書誌 (10件)

[文献書誌] Naoaki Sato: "Lysophosphatidylcholine decreases the synthesis of tissue factor pathway inhibitor in human umbilical vein endothelial cells." Thromb.Haemostas.79(1). 217-221 (1998)
[文献書誌] Koichi Kokame: "Activation of thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor requires EGF-like domain 3 of thrombomodulin and is inhibited competitively by protein C." J.Biochem.Chem.273(20). 12135-12139 (1998)
[文献書誌] Naoaki Sato: "Changes of gene expression by lysophosphatidylcholine in vascular endothelial cells:12 upregulated distinct genes including 5 cell growth-related, 3 thrombosis-related, and 4 others." J.Biochem.123(6). 1119-1126 (1998)
[文献書誌] Toshiyuki Miyata: "Analysis of gene expression in homocysteine-injured vascular endothelial cells." Semin.Thromb.Hemost.24(3). 285-291 (1998)
[文献書誌] Koichi Kokame: "Nonradioactive differential display cloning of genes induced by homocysteine in vascular endothelial cells." Methods. 16(4). 434-443 (1998)
[文献書誌] 小亀浩市: "血管内皮傷害に伴う遺伝子発現の変化." 血液アゴラ. 4. 59-70 (1997)
[文献書誌] 宮田敏行: "ホモシステインと血管内皮細胞傷害." 血管と内皮. 8(2). 133-141 (1998)
[文献書誌] 小亀浩市: "TAFI活性化とトロンボモジュリンのドメイン構造." 日本血栓止血学会誌. 9(6). 445-450 (1998)
[文献書誌] 宮田敏行: "関西血栓フォーラム「血小板血栓形成の分子機構」" ライフサイエンス出版, 253 (1997)
[文献書誌] 小亀浩市: "関西血栓フォーラム「血小板血栓形成の分子機構」" ライフサイエンス出版, 253 (1997)

1998 年度 実績報告書

血管内皮細胞の傷害性刺激に伴って発現量が増加する新規遺伝子産物RTPの機能探索

研究代表者

小亀 浩市 国立循環器病センター研究所, 病因部, 室員 (40270730)

研究成果

[文献書誌] Naoaki Sato: "Lysophosphatidylcholine decreases the synthesis of tissue factor pathway inhibitor in human umbilical vein endothelial cells." Thromb.Haemostas.79(1). 217-221 (1998)

[文献書誌] Koichi Kokame: "Activation of thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor requires EGF-like domain 3 of thrombomodulin and is inhibited competitively by protein C." J.Biochem.Chem.273(20). 12135-12139 (1998)

[文献書誌] Naoaki Sato: "Changes of gene expression by lysophosphatidylcholine in vascular endothelial cells:12 upregulated distinct genes including 5 cell growth-related, 3 thrombosis-related, and 4 others." J.Biochem.123(6). 1119-1126 (1998)

[文献書誌] Toshiyuki Miyata: "Analysis of gene expression in homocysteine-injured vascular endothelial cells." Semin.Thromb.Hemost.24(3). 285-291 (1998)

[文献書誌] Koichi Kokame: "Nonradioactive differential display cloning of genes induced by homocysteine in vascular endothelial cells." Methods. 16(4). 434-443 (1998)

[文献書誌] 小亀浩市: "血管内皮傷害に伴う遺伝子発現の変化." 血液アゴラ. 4. 59-70 (1997)

[文献書誌] 宮田敏行: "ホモシステインと血管内皮細胞傷害." 血管と内皮. 8(2). 133-141 (1998)

[文献書誌] 小亀浩市: "TAFI活性化とトロンボモジュリンのドメイン構造." 日本血栓止血学会誌. 9(6). 445-450 (1998)

[文献書誌] 宮田敏行: "関西血栓フォーラム「血小板血栓形成の分子機構」" ライフサイエンス出版, 253 (1997)

[文献書誌] 小亀浩市: "関西血栓フォーラム「血小板血栓形成の分子機構」" ライフサイエンス出版, 253 (1997)

1998 年度実績報告書

小亀浩市国立循環器病センター研究所, 病因部, 室員 (40270730)