幼若マウスの三叉神経主知覚核ではバレルとよばれる構造をしめすが、その核より視床VPM核に投射する三叉神経主知覚核視床路神経細胞を同定するため、ラテックスビーズによりピコポンプを用いて逆行性に標識することを試みた。その結果、標識される神経細胞の数が少数であるため今回の研究の系に不向きであると判断した。そのため、標識物質を変更し、電気生理学的手法を用いてにデキストランビオチン、バイオサイチンまたはニューロビオチンを、ピコピンプを用いてデキストランテキサスレッドを視床VPM核に注入した。その結果、三叉神経主知覚核視床路神経細胞はラテックスビーズを用いた場合よりも標識される神経細胞の数は増加したものの、細胞内色素注入に耐えうる数、部位に標識されておらず、注入法とりわけ注入部位が今後の課題となった。一方、潅流固定した脳よりスライスを作成しルシファー黄を電気泳動的に神経細胞に色素注入したところ、選択的に一つの神経細胞の樹状突起と軸索が染色された。そのため、叉神経主知覚核視床路神経細胞に対する逆行性標識法が確立されれば樹状突起の標識が可能となる見込みがある。また、今回の研究計画であるグルタミン酸受容体2サブユニットの欠失しているマウスの三叉神経主知覚核視床路神経細胞を標識しそのシナプス構築を電子顕微鏡で観察する方法を、グルタミン酸受容体2を欠失しているマウス(ノックアウトマウス)の小脳下オリーブを標識しプルキンエ細胞へのシナプス構築を調べる系に置き換えておこなったところ、その軸索すなわち登上線維が選択的に標識され、それは電子顕微鏡によっても観察できた。その結果、正常とはことなり登上線維の多重支配を示すシナプス構築が観察された。
|