臓器移植用形循転換家畜の作出に関する基礎研究

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09876073
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 東條 英昭 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (20041668)
• キーワード: トランスジェニック / EGFP / アンチセンス / 胚 / 超急性拒否反応

研究概要

1.異種移植用Tg家畜を作出するためには、超急性拒絶反応を抑制することが重要である。家畜では、相同組換えを利用した遺伝子欠損動物を作出することができない。そこで、本研究では、アンチセンス遺伝子の導入により内在遺伝子を欠損させることを試みた。基礎研究として、マウスα1,3-galactosyltransferaseアンチセンス遺伝子を作製しTgマウスの作出を行なった。現在1匹のTgマウスが得られており、遺伝子発現について解析中である。さらにTgマウスの作出も継続している。2.一方、Tg家畜作出における最大の課題は、Tg動物の作出効率がマウスに比べ著しく低いことである。胚発生の段階で、Tg胚を選別できれば、Tg動物の作出効率を顕著に向上させることができる。マウス胚を材料に、enhancedGFP(EGFP)をCMVenhance・chikenβ-actin promoterに連結した融合遺伝子をマーカーとした高精度のTg胚選別法を確立するために行なった。マウス由来の受精卵前核にCMV-β-actin/EGFP遺伝子を顕微注入し生存胚を体外培養した。4細胞-胚盤胞期に、蛍光顕微鏡で観察し、後期胚について、モザイク様に発光した胚と全体に発光した胚とに分類した。一部の胚を、Bal31・Dpnlを用いるTg胚選別により、蛍光発光とTg胚との関係について解析した。他の胚は、偽妊娠ICRマウスの子宮へ移植し、生まれたマウスのTg個体について解析した。なお、対照には非発光胚を用いた。4細胞期および8細胞期で蛍光発光で観察された場合もあったが、大部分は桑実期以後に強い発光が観察された。Soeらの方法によりTg胚を解析した結果、発光胚の約80%以上がTg胚と判定された。一方、非発光胚でも極一部Tg胚の存在が確認された。

研究成果

• [文献書誌] Suenaga A: "Quantitative analysis of the spreading of the mouse trophoblast in vitro : a model for early invasion." Placenta. 17. 583-590 (1996)
• [文献書誌] Hirota O.: "Effects of transfected human and mouse SRY/Sry genes upon the expression of hypothtical SRY-cascade genes in cultured mouse sertoli cell" Journal of Reproduction and Development. 42. 255-265 (1996)
• [文献書誌] Hase W: "Transgenic mice overexpressing forein whey acidic WAP genes driven by methallothionein promoter." Journal of Reproduction and Development. 42. 265-271 (1996)
• [文献書誌] Nagasawa H: "Changes of plasma level of human growth hormone with age in relation to mammary tumour appearance in wheyacidic protein/human" in vivo. 10. 503-506 (1996)
• [文献書誌] Seo B.B: "Efficient selection of preimplantation transgenic embryos by the improved procedures of the DpnI-Bal 31 digestion and polymerase chain" Reproduction.Fertility and Development. 9. 263-269 (1997)
• [文献書誌] Sasaki F: "Growth hormone releasing hormone (GHRH) GH-somatic growth and luteininzing hormone (LH) RH-LH-ovarian axes in adult female transgenic" Journal of Neuroendocrinology. 9. 615-626 (1997)
• [文献書誌] 東條英昭: "動物をつくる遺伝子工学" 講談社, 227 (1996)