血中PACAP特異的結合因子の生化学的研究

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09877035
• 研究機関: 国立循環器病センター
• 研究代表者: 宮山 篤郎 国立循環器病センター研究所, 生化学部, 室長 (60183969)
• キーワード: PACAP / 神経ペプチド / 血管平滑筋 / 細胞増殖 / ELISA

研究概要

Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide (PACAP)は、申請者らにより、ヒツジ視床下部より単離、構造決定した神経ペプチドで、その生理的役割は神経系、内分泌系、循環器系と、多岐にわたることが知られている。申請者はPACAPの循環調節系における役割を解明する目的で、PACAPの血中動態を検討する過程において血漿中にPACAP特異的結合因子が存在することを見いだした。平成9年度においては(1)PACAP特異的結合因子の性状解析を進めるとともに、(2)血中PACAPの測定系の確立及び(3)PACAPの血管平滑筋細胞(VSMC)の細胞増殖に及ぼす効果の検討を行った。
(1)PACAP特異的結合因子の性状解析において、ヒト血漿では、ラット血漿に比べPACAP特異的結合因子の含量が少ないことが明らかとなった。このことは、正常ヒト血漿中のPACAPレベルがラットに比べ非常に低いことと相関し、PACAP特異的結合因子がPACAPの分泌動態に深く関与することが示唆された。
(2)血中PACAPの測定系の確立においては、まず血漿抽出法の検討の結果、4%酢酸・ODSカラムによる抽出法によって最も効率よく抽出され、約70%の回収率であった。また以前確立していたRIA法では微量な血中PACAPを測定するには感度が不十分であったため、武田薬品の開拓第一研究所の音田博士よりPACAP特異的モノクローナル抗体を供与していただき、ELISAによる測定系の検討を行った。その結果、RIA系では4pgが検出限界であったが、ELISAでは1pgまで測定可能であった。
(3)血管平滑筋細胞(VSMC)の細胞増殖に及ぼす効果においては、PACAPが血清刺激によるVSMCの細胞周期のG0期からG1期への移行を促進し、G1期からS期への移行を抑制した。従ってPACAPはVSMCの細胞増殖に対して直接的には細胞周期依存的に正と負のbidirectionalな情報伝達により、また間接的にはオートクリンとして産生されるなんらかの成長因子の合成分泌を刺激することにより、VSMCの細胞増殖を巧妙に制御することが示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Sumimoto T.,et al.: "Plasma adrenomedullin concentrations and cardiac and arterial hypertrophy in hypertensionHypertension" Hypertension. 30. 741-745 (1997)
• [文献書誌] Nishikimi T.,et al.: "Plasma concentrations of adrenomedullin correlate with the extent of pulmonary hypertension in patients with mitral stenosis" Heart. 78. 390-395 (1997)
• [文献書誌] Miyata A.,et al.: "The effect of pituitary adenylate cyclase activating polypeptide on the proliferation of rat aortic smooth muscle cells." FASEB J.11. A1330- (1997)
• [文献書誌] Morimoto A.,et al.: "Effect of exercise on plasma aderenomedullin and natriuretic peptide levels in myocardial infarction." Clin.Exp.Pharmacol.& Physiol.24. 315-320 (1997)
• [文献書誌] Nishikimi T.,et al.: "Cardiac production and secretion of adrenomedullin are increased in heart failure." Hypertension. 30. 1369-1375 (1997)
• [文献書誌] Miyata A.,et al.: "Rat aortic smooth muscle cells are bidirectionally regulated in a cell cycle dependent manner via PACAP/VIP type 2 receptor." Regul.Pept.71. 122- (1997)
• [文献書誌] 編集代表:村松正実: "分子細胞生物学辞典" 東京化学同人, 1025 (1997)