新しいGTP結合蛋白(G_<13>)をかいしたイオンチャネル活性機序の解明

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09877220
• 研究機関: 熊本大学
• 研究代表者: 冨田 公夫 熊本大学, 医学部, 教授 (40114772)
• 研究分担者: 野々口 博史 熊本大学, 医学部附属病院, 講師 (30218341)
• キーワード: Gたんぱく / Clチャネル / パッチクランプ

研究概要

三量体GTP結合蛋白質のGa_<12>familyに属するGa_<13>のeffecter systemは未だ不明である。G proteinはadenylate cyclaseやphospholipase Cなどの酵素と共にKチャネルやCaチャネルをregulateすることが知られている。今回私達はGa_<13>のイオンチャネルに対する効果を検討した。Ga_<13>とcoupleすることが知られているthrombinをリガンドとして用いてCOS-7細胞でthrombinにより誘導される電流をパッチクランプ法により測定した。
Nystatin法によるvoltage clampにおいて、bath solution中のthrombin(1u/ml)により誘導されるCl電流が観察された。EGTA 10mMを添加したCa-freeの電極内液を用いたwhole cell法においても同様な電流が観察され、細胞内Caにindependentな現象と考えられた。この電流のI-V relationshipは-76mVから+24mVの範囲ではほぼohmicで、このCl電流はindomethacin(1mM)により抑制されたが、SITS(2mM)では変化はみられなかった。whole cell法において、電極内液に抗Ga_<13>抗体を加え、Cl電流への効果を観察した。wholw cell作成30分後、thrombin灌流によるCl電流の誘導は認められなかった。
これらのことより、Thrombin receptorはGa_<13>の活性化を介してCa independentにClチャネルを活性化していることが明らかになった。さらにGa_<13>が直接このチャネルを活性化している可能性についてinside-out patchにて検討中である。

研究成果

• [文献書誌] S.Naomi,: "Endothelin-1 inhibits endothelin converting enzyme-1 expression in cultured rat pulmonary endothelial cells." Circulation. 97. 234-236 (1998)
• [文献書誌] Y.Kitamoto,: "Vascular endothelial growth (VEGF) is an essential molecule for mouse kidney development : glomerulogenesis and nephrogenesis." J.Clin.Invest.,. 99. 2351-2357 (1997)
• [文献書誌] Kitamura, K.,: "Inhibition of nitric oxide synthase activity and nitric oxide-dependent calcium influx inrenalepithelial cells by cyclic adenosine monophosphate : implications for cell injury." J.Am.Soc.Nephrol.8. 558-568 (1997)
• [文献書誌] Disashi Tumba,: "Endothelin converting enzyme-1 gene expression in the kidney of spontanously hypertensive rats." Hypertension. 30. 1591-1597 (1997)
• [文献書誌] H.Nonoguchi,: "Low-protein diet and progression of chronic renal failure." Lancet. 350. 146 (1997)
• [文献書誌] Jun Koike,: "Quasi-steadiness approximationfor the two-compartment solute kinetic model." Kidney Int.52. 821-831 (1997)