ピロリ菌のホスホリパーゼ〜胃潰瘍・胃癌発症のニュートリガー〜

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09877437
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 杉山 政則 広島大学, 医学部, 教授 (30106801)
• 研究分担者: 小澤 孝一郎 広島大学, 医学部, 講師 (10211822)
• キーワード: 胃潰瘍 / 胃癌 / クローニング / 消化酵素 / Helicobacter pylori / ホスホリパーゼA2

研究概要

研究代表者は、これまで食物の消化酵素として考えられてきた、膵臓でつくられる膵ホスホリパーゼA_2(hPLA_2)が、膵癌細胞の増殖を促進することをごく最近発見したことから、 「胃に棲息するピロリ菌(Helicobacter pylori)が、もしも、ホスホリパーゼA_2を産生しているならば、本酵素が胃潰瘍や胃癌の要因となるかも知れない」という作業仮説を立てた。そこで、本研究では、胃組織検体から分離したピロリ菌のホスホリパーゼA_2活性を調べると共に、本酵素遺伝子のクローニングを目的とした。平成9年度の研究により、ピロリ菌のいくつかの株はホスホリパーゼA_2を産生することを確認したが、その生産量はごく微量であった。そこで、平成10年度は、大腸菌のホスト・ベクター系を用いてピロリ菌の染色体ライブラリーを作製することにした。具体的には、ピロリ菌の染色体DNAをHindIIIで消化後、pUC18に挿入し、Escherichia coli DH5αに導入した。その結果、1500個の形質転換体からなる染色体ライブラリーが作製できた、このライブラリーから任意に10クローンを選び、それぞれプラスミドを分離後、ゲノムの挿入の有無を調査した。その結果、10クローンすべてが0.5〜2.0kbの間でH.pylori染色体DNAのインサーションを持つことを確認した。そこで、これらのクローンがホスホリパーゼA_2活性を発現しているか否か、レシチンの加水分解活性を測定することによりアッセイした。その結果、No.36と命名したクローンが本酵素を産生することを見い出した。今後は、このクローンの有するDNAインサートの塩基配列を解析する。さらに、ホスホリパーゼA_2遺伝子を強力プロモーターの支配下に置くことにより、本酵素の大量産生系を確立すると共に、得られた酵素を用いて胃癌や胃潰瘍との関連性を調査する。

研究成果

• [文献書誌] Kumagai, T.: "Crystarization and preliminary X-ray diffraction studies of bleomycin-binding protein encoded on the transposon Tn5" Acta Cryst.Sec.D.in press. (1999)
• [文献書誌] Kumagai, T.: "Characterization of the bleomycin resistance determinant encoded on the transposon Tn5" FEBS lett.442. 34-38 (1999)
• [文献書誌] Ishikawa, Y.: "Oxidative and random cleavage of DNA by the novel iron (II) complex capable of yielding an iron (III) hydroperoxide intermediate" Chem.Lett.39-40 (1998)
• [文献書誌] Nishimura, M.: "Purification and characterization of a puromycin-hydrolyzing enzyme from blasticidin S-producing Streptomyces morookaensis" J.Biochem.123. 247-252 (1998)
• [文献書誌] Kumagai, T.: "Protection of mammalian cells from the toxicity of bleomycin by expression of a bleomycin-binding protein gene from Streptomyces verticillus" J.Biochem.124. 835-841 (1998)
• [文献書誌] Ikeda, K.: "Construction of a new cloning vector utilizing a cryptic plasmid and the highly expressed melanin-synthesizing gene operon from Streptomyces cataneoglobisporus" FEMS Microbiol.Lett.168. 195-199 (1998)
• [文献書誌] Kumagai, T.: "Crystallisation and preliminary X-ray diffraction studies of bleomycin-binding protein from bleomycin-producing Streptomyces verticillus" Acta Cryst.Sec.D. 54. 127-128 (1998)