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運動ニューロンの軸索ガイダンスに関わるcDNAを単離することを目的として、サブトラクションクローニングを行い、これまでに以下の結果を得た。
1. 方法
ニワトリ4.5日胚から、胸部、および腰部脊髄を別々に単離し、パンニング法により運動ニューロンを精製し、ここからmRNAを調製した。cDNAに変換した後、制限酵素処理し、両端にリンカーをつけ、このリンカーを用いてPCR法により増幅した。腰部運動ニューロンcDNAから、胸部運動ニューロンcDNAをビオチンアビジン法を用いて差し引き、さらにこの一部をシークエンスゲル上にdisplayし、特異的発現を示す断片を単離した。これをベクターに繋ぎ、塩基配列を決定しデータベースを照合して、配列の相同性を調べた。
2. 結果
1つはごく最近クローニングされたショウジョウバエRoundabout(Robo)遺伝子のニワトリホモログであることが判明した。Roboは、神経軸索先端の成長円錐に特異的に発現し、正中線を越えるプロセスを制御している新たな受容体分子として、University of Ca1iforniaのCorey GoodmanらによりCellに報告された。Roboのin situ hybridizationを行い、運動ニューロン、体節に発現していることを明らかにした。この分子のニワトリ運動ニューロンにおける機能を明らかにしたいと考えている。またその他の分子については現在、探索を続けている。
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