研究課題
真核生物の新奇翻訳伸長因子候補であるEFLタンパク質の機能解析を行うため、コントロールとして別の珪藻Phaeodactylumが持つ「機能している翻訳伸長因子EF-lalpha」、そしてThalassiosiraの持つ2つの翻訳伸長因子「機能を失っているかもしれないEF-lalpha」および「機能していると考えられるEFL」のコンストラクトを作成した。酵母導入実験を行ったが、いずれのコンストラクトも補完可能であるというデータは得られなかった。この原因が珪藻と酵母間のコドン使用頻度の違いにあるのではないか、という仮説の下、コントロールとしてコードするアミノ酸は変えずコドンを変えた人工合成遺伝子を持つコンストラクトを作成した。酵母導入実験を試みたが、補完可能であるというデータは得られなかった。コドン使用頻度を酵母のものに合わせて人工合成遺伝子を作成したため、上述した結果の解釈としては、酵母のリボソームとの相互作用が効率よく行われなかった可能性が高い。すでに珪藻Phaeodactyluym EF-lalphaおよびThalassiosira EFL、EF-lalphaに対する特異的ポリクローナル抗体を作成済みであり、本抗体を用いてタンパク質に翻訳されている事を確認していく予定である。In vitro系におけるタンパク質合成キットのためのコンストラクトを作成し、大量発現系確立のための基礎を築く実験を行った。PhaeodactylumのEF-lalphaの全長を導入したコンストラクトを作成し、タンパク質を合成した。理論的にキットで得られるとされる量に相当するタンパク質量を合成により得ることができたため、来年度以降は本タンパク質合成系を使用して生化学的解析を行う予定である。同時に、ThalassionsiraおよびPhaeodactylumの大量培養を行い、標的タンパク質を簡便に大量取得できる系を確立する。
すべて 2010 2009
すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 3件) 学会発表 (7件)
Phycological Research 58
ページ: 44-52
Protist 160
ページ: 364-375
Molecular Phylogenetics and Evolution 53
ページ: 565-570
