機能性RNA(リボザイム、RNAアフタマー、siRNA)は遺伝子発現制御機能を有することから、様々な疾患に対する夢の新薬として期待されており、事実、医薬品として利用されつつある。このため今後機能性RNAの高い需要が予期されることから、機能性RNAの大量生産技術は必要不可欠である。しかし機能性RNAの大量生産を目指す際、現存するRNA合成法ではコスト、簡便性の面で多くの問題を抱えている。そこで解決策として培養液中へ自身のDNA、RNAを放出する海洋性光合成細菌」Rhodovulum sulfidophilumを用い、機能性RNAを発酵生産させることを考案した。現在までに本菌由来の転写プロモーターとその下流に機能性RNA配列を組込んだプラスミドDNAを本菌へ導入することにより、機能性RNAを培養液中へ生産させることに成功している。しかし問題点として機能性RNAの生産量が多くないことが挙げられた。 そこで当該年度は、機能性RNAの生産量増大を目指した。方法として 1.菌体内で機能性RNAを合成するための転写プロモーターの改良 2.生産された機能性RNAの安定化(tRNA型機能性RNAの生産) 1.においては、以前まで用いてきた転写プロモーターよりもおよそ50倍もの機能性RNAの生産量を示すプロモーターを得ることができた。2.においては、tRNAの様な形を機能性RNAに取らせ、本菌の内在性RNA分解酵素からの分解を防ぐことにより以前よりも7倍もの機能性RNAを培養液中へ生産させることに成功した。これらの結果より現段階では、約0.3~0.5μg/Lの機能性RNAを培養液中へ生産することができており、現存するRNA合成法の合成量に大きく近づいた。更なる機能性RNAの生産量増大は必要であるが、本年度の結果は本菌を用いた機能性RNAの発酵生産の実用化に向け、大きく貢献した。
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