| 研究概要 |
遺伝情報を担うDNAには様々な内因性・外因性の因子により構造障害が発生する.その結果,遺伝情報が変異し癌や遺伝病が発生する.本研究では,現在未知の部分が多い哺乳類の塩基除去修復酵素の機能解析を行った.
チミン損傷[チミングリコール(TG)・ウレア・ホルミルウラシル(FU)]およびシトシン損傷[ヒドロキシウラシル]を含むDNA基質を合成し,マウスEndo IIIホモログ(mNTH1)の酵素特性を検討した.標識したTGを含むDNAとmNTH1をインキュペートすると,TGがDNAからリリースされた.さらに,オリゴヌクレオチド基質をmNTH1とインキュベート後,生成物をポリアクリルアミド電気泳動で分析した.メチル基の酸化損傷FUを含む基質は酵素により切断されなかったが,他の損傷を含む基質は損傷部位で特異的に切断された.したがって,mNTH1は,大腸菌のendo IIIと同様な基質特異性をもち,N-グリコシラーゼとして作用することが明らかとなった.
8-オキソグアニン(8-oxoG)及びホルムアミドピリミジン(Fapy)を含む基質を用いて,Fpg並びにhOGG1の酵素特性を検討した.両基質に対する酵素パラメータから,Fpg及びhOGG1はそれぞれ,8-oxoG及びFapy両基質に対して同程度の反応効率(k_<car>/K_m)を示すが,酵素間で比較すると,hOGG1の反応効率はFpgより約80倍低いことが明らかとなった.さらに,Fpg及びhOGG1の8-oxoG修復効率は,対合塩基の種類によって著しく変化することが報告されていることから,Fapyについても同様な検討を行った.その結果,両酵素のFapy修復効率は,8-oxoGの場合とは異なり,対合塩基の種類には大きく影響されないことが明らかとなった.
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