カイコシスティンプロデアーゼ(BCP):X線結晶解析と活性化機構に関する研究

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10044210
• 研究種目: 国際学術研究
• 応募区分: 共同研究
• 研究機関: 山口大学
• 研究代表者: 高橋 進 山口大学, 農学部, 教授 (90022665)
• 研究分担者: RAIKHEL A.S. ミシガン大学, 遺伝学研究所, 教授 ; BOWNES M. エディンバラ大学, 分子研究所, 教授 ; 景山 節 京都大学, 霊長研, 助教授 (20027501) ; 山本 芳実 山口大学, 農学部, 助教授 (40115514) ; 渡部 省二 山口大学, 農学部, 助教授 (30113020)
• キーワード: ProBCP / 活性化 / システインプロテアーゼ / 阻害剤

研究概要

本研究は、BCP前駆体の立体構造および活性化機構を明らかにする目的で実施されている.本年度実績の概容は以下のとうり.
1: 大量のBCP前駆体がたの精製に成功する(200mg)
2: 高圧電子顕微鏡による蛋白質のネガティブ染色像を得ることに成功する(現在継続中)
3: CDスペクトルを用いた活性化の際の立体構造の変化についてデータを得て現在コンピューターによりデータ解析中.
4: In vitro mutagenesis法を用い、プロペプチドの活性阻害部位を検討した.
5: X-線解析用の予備的結晶をえた.
6: これらの過程で山本は、これまでに知られていなかった全く新たなシステインブロテアーゼの阻害蛋白質(BCP特異的)を発見しその精製、cDNAのクローニングに成功した.アミノ酸および塩基配列の両面から全一次構造を決定した.

研究成果

• [文献書誌] 猪熊,高橋: "Duration of antibodies against 24kDa protein of Rhipicephalus sanguineus extract in dogs infested with the adult ticks" J.vet.med.Sci. 61. 179-181 (1999)
• [文献書誌] 加藤,高橋: "Ca2+-dependent phosphorylation and proteolysis of tetrahydrobiopterin generating enzymes." Pteridines. (in press). (1999)
• [文献書誌] 山本,渡部,高橋: "A novel inhibitor protein for Bombyx cysteine protease (BCP) is homologous to propeotide regions of cysteine proteases" FEBS Lett. (in press). (1999)
• [文献書誌] 山本,渡部,高橋: "Propeptide region of Bombyx cyctein protease (BCP) functions as a chaperone-like protein to romote proper folding of the mature enzyme." Arch.Insect Biochem & Physiol. (in press). (1999)
• [文献書誌] 山本,渡部,高橋: "Purification and characterization of Bombyx cysteine protease (BCP) specific inhibitors from the hemolymph of Bombyx mori." Arch.Insect Biochem & Physiel.(in press). (1999)
• [文献書誌] 中村,高橋: "生きもののからくり" 培風館(中村 高橋共編), 215 (1998)
• [文献書誌] 渡部,山本,高橋: "医歯薬出版,(日本電気泳動学会偏)" 電気泳動実験法=オートラジオグラフィーとその実際, 470 (1999)