自己免疫性および遺伝性水泡症における疾患特異的治療法に関する基礎的研究

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10044318
• 研究機関: 慶應義塾大学
• 研究代表者: 西川 武二 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (50051579)
• 研究分担者: 橋本 公二 愛媛大学, 医学部, 教授 (00110784) ; 天谷 雅行 慶應義塾大学, 医学部, 専任講師 (90212563) ; 清水 宏 慶應義塾大学, 医学部, 助教授 (00146672) ; 橋本 隆 久留米大学, 医学部, 教授 (20129597)
• キーワード: 自己免疫性皮膚疾患 / 遺伝性皮膚疾患 / デスモグレイン / ラミニン5 / VII型コラーゲン / 動物モデル / ノックアウトマウス / 遺伝子解析

研究概要

本年度は、自己免疫性疾患に対して組換え毒素を用いた抗原特異的B細胞除去に重点が置かれた。対象疾患は、表皮接着分子であるデスモグレイン3(Dsg3)に対する自己抗体が産生される尋常性天疱瘡である。Dsg3の細胞外領域と毒素Pseudomonas Exotoxin(PE40)とのキメラ分子(組換え毒素)を大腸菌の発現系にて作製した。自己抗体産生B細胞の膜表面にはDsg3に対するイムノグロブリン受容体が発現されており、組換え毒素はDsg3部分がリガンドとなり抗原特異的にB細胞を認識できる。Dsg3に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞、ならびにDsg3にて免役したマウスの脾細胞を標的細胞として、毒素活性を検討したところ、抗原特異的に約60%の細胞を除去することに成功した。本研究の成果は、抗原特異的B細胞破壊法の実用化に向けて大きく一歩前進したことになる。また、天疱瘡における水疱形成機序が明らかにされ、異なるアイソタイプのデスモグレインが細胞間接着膿を補うことが明らかになった(desmoglein compensation theory)。新生児に尋常性天疱瘡は認められるが落葉状天疱瘡が認められない理由が明らかになり、表皮上層でDsg3を発現させることにより落葉状天疱瘡の発症を阻害することに成功した。こられの結果は、天疱瘡に対する全く新しい治療法の方向性があることを示している。
一方、遺伝性皮膚疾患においては、昨年同様、栄養障害型表皮水疱症並びに接合部型表皮水疱症の国内外における症例が集積され、各症例における遺伝子変異部位の同定がなされた。さらに、遺伝子変異部位と臨床症状との相関関係が解析された。また、表皮培養シートを安定に作成し、供給するための手技が確立され、臨床応用の結果、良好な成績が得られた。本研究の達成に、本研究費による米国、英国の研究機関との情報交換、共同研究が有用であった。

研究成果

• [文献書誌] Mahoney MG,Wang Z,Rothenberger KL,Koch PJ,Amagai M,Stanley JR.: "Explanation for the clinical and microscopic localization of lesions in pemphigus foliaceus and vulgaris"J Clin Invest. 103. 461-468 (1999)
• [文献書誌] Wu H,Wang ZH,Yan A,Lyle S,Fakharzadeh S,Wahl JK,Wheelock MJ,Uitto J,Amagai M, Stanley JR.: "Protection of neonates against pemphigus foliaceus by desmoglein 3"N Eng J Med(in press). (2000)
• [文献書誌] Ishii K,Amagai M,Komai A,et al.: "Desmoglein 1 and desmoglein 3 are the target autoantigens in herpetiform pemphigus"Arch Dermatol. 135. 943-947 (1999)
• [文献書誌] Nishifuji K,Amagai M,Kuwana M,Iwasaki T,Nishikawa T: "Detection of antigen-specific B cells in patients with pemphigus vulgaris by enazme-linked immunospot(ELISPOT)Assay:requirement of T cell collaboration for autoantibody production"J Invest Dermatol. 114. 88-94 (2000)
• [文献書誌] Proby CM,Ohta T,Suzuki H,et al.: "Development of chimeric molecules for recognition and targeting of antigen-specific B cells in pemphigus vulgaris"Br J Dermatol. (in press). (2000)
• [文献書誌] Amagai M,Tsunoda K,Suzuki H,Nishifuji K,Koyasu S,Nishikawa T: "Use of autoantigen knockout mice to develop an active autoimmune disease model of pemphigus"J Clin Invest. (in press). (2000)
• [文献書誌] Amagai M: "Advabces in pemphigus foliaceus and pemphigus vulgaris"In D.Dyall-Smith&Marks(Eds.)Dermatology at Millennium:Proceeding of 19th World Congress of Dermatology New York:Parthenon Publishing. 812 (1999)