環境発がん物質による発がん過程における遺伝子変異

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10151257
• 研究機関: 国立がんセンター
• 研究代表者: 中釜 斉 国立がんセンター, 研究所・生化学部, 部長 (30198030)
• 研究分担者: 稲森 英明 国立がんセンター, 研究所・生化学部, 研究員 (00311415)
• キーワード: Colon carcinogenesis / mammary carcinogenesis / PhIP / ACF / beta catenin / Apc / Loss of heterozygosity(LOH) / methylation

研究概要

加熱肉食品中に多く含まれヒトが日常に摂取している変異原がん原物質、2-amino-1-methyl-6-phenylimidazo[4,5-b]pyridine(PhlP)で誘発されるラット大腸がん及び乳がんの遺伝子変異スペクトラム、メチル化などの変化を解析し、PhlP等の環境中で生成される発がん物質がヒト発がんにどのように関与しているかを解明する。PhlP誘発のラット大腸がん、及び大腸前がん病変aberrant cryptfoci(ACF)について遺伝子変異を解析した結果、Apd遺伝子のPhlP標的配列を含むexon14,15において15例中2例で変異を認めた。β-catenin遺伝子では、exon3のGSK3βによるリン酸化配列を含むコドン32〜45の変異を4例に認めた。β-cateninの免疫組織染色では大部分の腫瘍が濃染されたことから、Apcおよびβ-catenin遺伝子の上記の領域以外に変異が存在する可能性が示唆された。一方、ACFではPCR-SSCP解析でβ-cateninの遺伝子異常が疑われた1例を除き、ApcおよびK-rasの異常は認めなかったことから、ACF誘発にはApc,β-catenin或いはK-ras以外の遺伝子の関与が示唆される。さらに、PhlP大腸発がんにおけるメチル化の役割を解明するため、p16遺伝子のexon1を含むプロモーター領域のメチル化状態について、methylation sensitive(MS)-PCR法を用いて検討した。解析した7例の大腸腫瘍および2例の正常組織のいずれにおいても、メチル化アレルに特異的なPCR産物は認めなかった。現在は、腫瘍におけるLOH解析を高速かつ効率良く行うことを目標に、degenerate primerを用いたPCR法によるsingle nucleotide polymorphism(SNP)マーカーの大量単離、及び遺伝子ベースのSNPマーカーの単離を併せて進めている。

研究成果

• [文献書誌] Nakagama H,et al.: "Genetic analysis of the susceptibility in rats to aberrant crypt foci formation 2-amino-1-methy1-6-phenyl imidazo〔4,5-b〕pyridine,PhIP" Cancer Letter. (in press).
• [文献書誌] Ishiguro Y,et al.: "Strain differences of rats in the susceptibility to aberrant crypt foci formation by 2-amino-1-methyl-6phenyl-imidazo〔4,5-b〕pyridine" Carcinogenesis. (in press).
• [文献書誌] Masutani M,et al.: "Poly (ADP-ribose)polymerase gene-disruption conferred mince resistant to streptozotocin-induced diabetes" Proceedings of the National Academy of Sciences,USA. 96. 2301-2304 (1999)
• [文献書誌] Yamada S,et al.: "Linkage mapping of the Bra,Brb and Brg genes for rat protein phosphatase 2A55kDa B-regulatory subunit isotypes" Japanese Journal of Cancer Research. 89. 1014-1019 (1998)
• [文献書誌] Nagao M,et al.: "Genetic determinants and environmental carcinogen" Mutation Research. 402. 85-91 (1998)
• [文献書誌] Dashwood R,et al.: "High frequency of β-catenin (Ctnnb1)mutations in the colon tumors induced by two heterocyclic amines in the F344 rat" Cancer Research. 58. 1127-1129 (1998)