リンパ腫瘍におけるサイクリンD1トランスクリプトbの役割と診断、治療への応用

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10153273
• 研究機関: 愛知県がんセンター
• 研究代表者: 細川 好孝 愛知県がんセンター, 化学療法部, 室長 (60229193)
• 研究分担者: 中村 栄男 愛知県がんセンター, 研究所, 研究員 (80180363) ; 瀬戸 加大 愛知県がんセンター, 化学療法部, 部長 (80154665)
• キーワード: サイクリンD1 / 悪性リンパ腫 / 免疫組織化学 / モノクローナル抗体

研究概要

我々が独自に単離したサイクリンDlトランスクリプトbのリンパ腫瘍における役割ならびに診断、治療への応用をめざし、今年は以下の諸点を明らかにした。1)サイクリンD1を過剰発現する30種の固型癌、血球系細胞培養株をRT-PCR,Northern blot法でスクリーニングした。その結果、t(11;14)を示すマントル性細胞腫瘍、多発性骨髄細胞腫瘍株で特異的にサイクリンDlトランスクリプトbが高発現していることを見いだした。さらに、トランスクリプトa,bを同時に認識するモノクローナル抗体を用いて、細胞内でトランスクリプトb蛋白産物を世界で初めて検出した。2)発現誘導系を用いたトランスクリプトbの機能解析。サイクリンD1トランスクリプトa,bのcDNAをLacoperator plasmidに挿入し、Lacrepressor vectorと供にマウスPro-B BAF3細胞に導入して、サイクリンD1トランスクリプトa,bを自由に発現誘導する系を樹立した。この系を用いてトランスクリプトa,b産物による細胞周期制御機構を検討いているが、予備的データとして、供にG1期を短縮することが判明している。3)免疫組織染色我々は、すでにCyclin D1に対するモノクローナル抗体5D4を作製し、免疫組織染色を確立した。我々はトランスクリプトb産物のC末端側ペプチドを合成および融合蛋白質を発現させ、特異的抗体の作製中である。その半減期が長いと考えられるトランスクリプトb産物に対する特異抗体を用いて、リンパ腫検体を免疫染色し、予後との相関、悪性度との関連について検討する。我々が独自に単離したサイクリンD1トランスクリプトbの蛋白質産物が今回初めて同定され、その機能の一端が明らかになりつつある。今後、免疫組織染色法の確立による診断、治療への応用、さらにトランスジェニックマウス作製によるin vivoでの生物学的機能の研究を推し進める。

研究成果

• [文献書誌] Hosokawa,Y.et al.,: "Cyclin D1/PRAD1/BCL-1 alternative transcript|b]protein product in B-lymphoid malignancies with t(11;14)(q13;q32)translocation." International Journal of Cancer. (in press). (1999)
• [文献書誌] Hosokawa,Y.et al.,: "A small deletion in the 3'-untranslated region of cyclin D1/PRAD1/BCL-1 oncogene in a patient with chronic lymphocytic leukemia" International Jouranl of Cancer.76. 791-796 (1998)
• [文献書誌] Hosokawa,Y.et al.,: "Molecular Mechanism of Overexpression of Cyclin D1/PRAD1 in Human Tumor Cell Lines;Analysis of Allele-specific Expression." Gene Chromosome Cancer. 22. 66-71 (1998)
• [文献書誌] Hosokawa,Y.et al.,: "Human Cyclin D1(PRAD1)Alternative Transcript b:Full-length cDNA Cloning Expression in Breast Cancers." Cancer Letters. 113. 123-130 (1997)
• [文献書誌] Joh,T.et al.,: "Establishment of an inducible expression system of chimeric MLL-LTG9 protein and inhibition of Hox a7,Hox b7 and Hox c9 expression by MLL-LTG9 in 32Dcl3 cells" Oncogene.18. 1125-1130 (1999)
• [文献書誌] Akagi,T.et al.,: "Molecular Cytogenetic Delineation of the Breakpoint at 18q21.1 in low-Grade B-Cell Lymphoma of Mucosa-Associated Lymphoid Tissue." Gene Chromosome Cancer.(in press). (1999)