| 研究概要 |
一酸化窒素(NO)は低分子量の拡散性ガス分子でありフリーラジカル構造を有する化学反応性に富んだ気体である.脳においてNOは,海馬における長期増強や小脳の長期抑圧を起こす一方,一過性脳虚血におけるニューロン死などに関与することも報告されている.しかしながら,NOによる細胞死実行過程については不明な点が多い.私たちはFasやTNF-αなどによって活性化されるアポトーシス実行因子の一つであるcaspaseについて着目し,その経路の関与について調べた.NOドナーであるNOC18はヒト神経芽細胞腫SH-SY5Yにおいて細胞死を惹起した.この細胞死はアポトーシス様でありNOC18から放出されるNOによるものであることを確認した.さらに,NOC18によるSH-SY5Y細胞アポトーシスは,caspaseファミリーの非選択的阻害薬であるZ-Asp-CH_2-DCBによって抑制された.また,NOC18によりcaspaseの基質であるPARPの切断が認められた.NOによるcaspaseの活性化機構とそのサブタイプを特定するために,まず,NOC18処理した細胞質画分におけるDEVDとYVADの切断活性を検討したところ,DEVDのみ切断された.また,ウェスタンブロット解析からpro-caspase-2のタンパク質レベルでの減少も認められた.さらには,NOC18はミトコンドリアから細胞質画分へのチトクロームCの漏出をも引き起こした.以上のことから,SH-SY5Y細胞においてNOはアポトーシスを誘導するが,その経路の一部にミトコンドリアからのチトクロームCの放出,caspase系(caspase-2,-3)の活性化が関与している可能性が示唆された.
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