1998 年度実績報告書

白血病の原因となる融合遺伝子mRNAを標的とするリボザイムの設計

研究課題

研究課題/領域番号	10174230
研究機関	埼玉県立がんセンター
研究代表者	神津知子埼玉県立がんセンター, 研究所, 主任研究員 (60161874)
研究分担者	福山朋房埼玉県立がんセンター, 研究所, 研究員 (10300906) 末岡榮三朗埼玉県立がんセンター, 研究所, 研究員 (00270603)
キーワード	リボザイム / 白血病 / 融合遺伝子 / アンチセンス / RNase H / 遺伝子治療
研究概要	私共は、t(8;21)転座型白血病融合遺伝子AML1-MTG8をモデルとして、融合mRNAのみを選択的に切断するリボザイムを設計している。融合点近傍を標的とするDNA/RNAキメラハンマヘッドリボザイムを作製し、これまでに1) 各々のリボザイムでは触媒効率が大きく異なること、2) t(8;21)転座型白血病細胞株SKNO-1に対して増殖抑制効果を示すこと、3) SKNO-1細胞の分離核を用いてこれらのリボザイムの内在性AML1-MTG8mRNA切断のメカニズムを解析した結果、アンチセンス効果を持つこと、4) AML1-MTG8mRNAの融合領域は核内で露出しており、アンチセンス/リボザイムの格好のターゲットである、等を見い出した。本研究では、分離核を用いてさらにアンチセンス効果とリボザイム触媒活性を検討した。SH阻害剤によって内在性RNase Hを抑えると、DNA/RNAリボザイムのアンチセンス効果はなくなり、リボザイム触媒活性による切断が検出された。All-RNAリボザイムでもAML1-MTG8mRNAの特異的な切断が検出した。従って、リボザイムは核環境内でアンチセンス効果よりは弱いが、確かに触媒活性を示すことが明かとなった。DNA/RNAリボザイムやアンチセンスオリゴヌクレオチドの細胞増殖抑制効果は、強力ではあるがリバーシブルであるため、連続投与が必要である。そのため、リボザイムを細胞内で継続的にかつ効率よく発現させる系が有効である。そこで、CMVプロモーターによるリボザイム発現ベクターを作製し、SKNO-1細胞で一過性に発現させると、AML1-MTG8mRNAの減少が見られた。現在より強いリボザイム発現ベクターを開発中である。これらの結果より、融合遺伝子の発現を抑えるリボザイムによる白血病遺伝子治療が可能であることが示唆され、今後の発展が期待できる。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] E.Sueoka,T.Kozu, et al.: "Tumourgenicity of MTG8, a leukemia related gene, in concert with v-Ha-ras gene in BALB/3T3 cells." Br.J.Haematol.101. 737-724 (1998)
[文献書誌] E.Sueoka,T.Kozu, et al.: "Cancer inhibition by green tea." Mutation Res.402. 307-310 (1998)
[文献書誌] E.Sueoka,T.Kozu, et al.: "Association of MTG8(ETO/CDR), a leukemia-related protein, with serine/thrreonine protein kinases and heat shock protein HSP90 in human hematopoietic cell lines." Jpn.J.Cancer Res.90. 60-68 (1999)
[文献書誌] E.Sueoka,T.Kozu, et al.: "Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein B1 as a new marker of early detection for human lung cancers." Cancer Res.(in press). (1999)
[文献書誌] Sueoka,E., et al.: "Molecular pathogenesis of interstitial pneumonitis with TNF-a transgenic mice" Cytokine. 10. 124-131 (1998)
[文献書誌] Sueoka,E., et al.: "Anticancer activity of morphine and its synthetic derivative, KT-90, mediated through apoptosis and inhibition of NF-kB activation." Biochem.Biol.Res.Commun.252. 566-570 (1998)
[文献書誌] E.Sueoka,T.Kozu, et al.: "Clinical and Biological Basis of Lung Cancer Prevention" Birkhauser Verlag Vasel,Switzerland, 285-290 (1998)

1998 年度 実績報告書

白血病の原因となる融合遺伝子mRNAを標的とするリボザイムの設計

研究代表者

神津 知子 埼玉県立がんセンター, 研究所, 主任研究員 (60161874)

研究成果

[文献書誌] E.Sueoka,T.Kozu, et al.: "Tumourgenicity of MTG8, a leukemia related gene, in concert with v-Ha-ras gene in BALB/3T3 cells." Br.J.Haematol.101. 737-724 (1998)

[文献書誌] E.Sueoka,T.Kozu, et al.: "Cancer inhibition by green tea." Mutation Res.402. 307-310 (1998)

[文献書誌] E.Sueoka,T.Kozu, et al.: "Association of MTG8(ETO/CDR), a leukemia-related protein, with serine/thrreonine protein kinases and heat shock protein HSP90 in human hematopoietic cell lines." Jpn.J.Cancer Res.90. 60-68 (1999)

[文献書誌] E.Sueoka,T.Kozu, et al.: "Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein B1 as a new marker of early detection for human lung cancers." Cancer Res.(in press). (1999)

[文献書誌] Sueoka,E., et al.: "Molecular pathogenesis of interstitial pneumonitis with TNF-a transgenic mice" Cytokine. 10. 124-131 (1998)

[文献書誌] Sueoka,E., et al.: "Anticancer activity of morphine and its synthetic derivative, KT-90, mediated through apoptosis and inhibition of NF-kB activation." Biochem.Biol.Res.Commun.252. 566-570 (1998)

[文献書誌] E.Sueoka,T.Kozu, et al.: "Clinical and Biological Basis of Lung Cancer Prevention" Birkhauser Verlag Vasel,Switzerland, 285-290 (1998)

1998 年度実績報告書

神津知子埼玉県立がんセンター, 研究所, 主任研究員 (60161874)