血管障害における細胞接着分子セレクチンとリガンド糖鎖の関与についての研究

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10177234
• 研究機関: 愛知県がんセンター
• 研究代表者: 神奈木 玲児 愛知県がんセンター, 病理学第二部, 部長 (80161389)
• キーワード: セレクチン / ホーミング / スルホトランスフェラーゼ / フコシルトランスフェラーゼ / シリアルLe^X / 血管内皮細胞 / トランスフェクション

研究概要

動脈硬化性病変の発生に、セレクチンと糖鎖を介する細胞接着が関与することが示唆されている。我々は昨年、ヒトリンパ節高血管内皮細静脈HEV血管内皮細胞上のL-セレクチンリガンドが、6-スルホシアリルルイスxであることを、特異抗体の作成を通じて証明した。6-スルホシアリルルイスx糖鎖は、その構造から見て、フコシルトランスフエラーゼとスルホトランスフェラーゼによって合成されると考えられる。そこで今回、この両酵素の遺伝子をリガンド活性のない培養血管内皮細胞株に導入して、L-セレクチンリガンドの再構成を試みた。すなわち、以前YT細胞から得られたフコシルトランスフェラーゼVII(Fuc-TVII)と今回新たにクローニングされたGlcNAcβ:6-スルホトランスフェラーゼ(6-Sul-T)を、ヒトHUVEC由来のヒト血管内皮細胞株ECV304に単独または二重に導入して、フローサイトメトリーと細胞接着実験にてシアリル6-スルホルイスxの発現とL-セレクチン陽性細胞の接着能を検索した。フローサイトメトリーの結果、ECV304細胞の糖転移酵素トランスフェクタントのうち、シアリルルイスxは、Fuc-TVII強制発現クローンおよびFuc-TVII・6-Sul-Tの二重強制発現細胞に検出された。シアリル6-スルホラクトサミンは、6-Sul-T強制発現細胞およびFuc-TVII・6-Sml-Tの二重強制発現細胞に検出されたシアリル6-スルホルイスxは、Fuc-TVII・6-Sul-Tの二重強制発現細胞にのみ検出された。細胞接着実験の結果、L-セレクチン発現細胞は、この4種の細胞のうち、Fuc-TVII・6-Sul-Tの二重強制発現細胞にのみ接着した。この接着は、抗L-セレクチン抗体で完全に阻害され、抗シアリル6-スルホルイスx抗体で強く阻害された。これにより、リンパ節の高血管内皮細胞に発現されるL-セレクチンリガンド糖鎖6-スルホシアリルルイスxは、フコシルトランスフェラーゼ(Fuc一TVII)と6-スルホトランスフエラーゼ(6-Sul-T)を二重にトランスフェクトすることによって再構成できることが証明された。

研究成果

• [文献書誌] Mitsuoka,C.,Sawada,M.,Ando,K.,et al.: "Identification of a major carbohydrate capping group of the L-selectin ligand on high endotehelial venules in human lymph nodes as 6-sulfo sialyl Lewis x" J.Biol.Chem.273. 11225-11233 (1998)
• [文献書誌] Kumamoto,K.,MItsuoka,C.,Izawa,M.,et al.: "Specific detection of sialyl Lewis x determinant carried on the mucin G1cNAcβ1->6Ga1NAcα as tumor-associated antigen" Biochem.Biophys.Res.Commun.247. 514-517 (1998)
• [文献書誌] Uchimura,K.,Muramatsu,H.,Kadomatsu,K.,et al.: "Molecular cloning and characterization of an N-acetylglucosamine-6-0-sulfotransferase" J.Biol.Chem.273. 556-564 (1998)
• [文献書誌] Fan,Q.W.,Uchimura,K.,Yuzawa,Y.,et al.: "Spatially and temporally regulated expression of N-acetylglucosamine-6-0-sulfotransferase during mouse embryogenesis" Glycoconjugate J.in press. (1999)
• [文献書誌] Mitsuoka,C.,Ohmori,K.,Kimura,N.,et al.: "Regulation of selectin binding activity by cyclization of sialic acid moiety of carbohydrate ligands on human leukocytes" Proc.Nat1.Acad.Sci.USA. in press. (1999)
• [文献書誌] Komba,S.,Galustian,C.,Ishida,H.,et al.: "First total synthesis of 6-sulfo de-N-acetyl-sialyl Lewis x ganglioside: a superior ligand for human L-selectin" Angew.Chem.(Engl). in press. (1999)
• [文献書誌] Kannagi,R.: "Leukocyte Typing VI." Garland Publishing Inc., 348-351 (1998)
• [文献書誌] Kannagi,R.: "Leukocyte Typing VI." Garland Publishing Inc., 352-355 (1998)