アドレノメデュリンの循環調節作用機序の解析

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10218202
• 研究種目: 特定領域研究(B)
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 平田 恭信 東京大学, 医学部・附属病院, 講師 (70167609)
• 研究分担者: 鈴木 越 東京大学, 医学部・附属病院, 医員
• キーワード: アドレノメデュリン / 低酸素 / 遺伝子 / 尿細管 / 血管平滑筋細胞

研究概要

虚血腎におけるアドレノメデュリン(AM)の発現およびその機序を検討するため低酸素下でのAMの動態をin vivo,in vitroの系で解析した。Wistar Ratの腎動脈を結紮し経時的な腎内AM mRNAの発現をNorthem blot法により評価した。またイヌ腎集合管(MDCK)、ラットメサンギウム(rGMC)、ラット大動脈平滑筋(rVSMC)培養細胞を低酸素下に置き、AM(RLA)、AM mRNAレベルを測定した。ヒトAM遺伝子プロモータ領域をluciferase reporter geneの上流に組み込み、transient transfectionにより同部位の低酸素刺激による転写活性を検討した。またAM mRNAの安定性についても検討した。腎動脈の6時間結紮後の腎ではAM mRNAが2倍に増加した(P<0.05)。低酸素6時間後にMDCK細胞のAM mRNAは最大2.8倍の増加(P<0.01)、またrVSMCでは12時間後に最大2.9倍の増加(P<0.01)を認めた。MDCK細胞培養上清中のAMも低酸素導入後6時間で3.5±0.3fmol/105 cellsと対照の2.2±0.lfmol/l05 cellsより有意の増加を認めた(P<0.001)。ヒトAM遺伝子プロモータ領域を含むvectorをtransfectionしたrVSMCでは低酸素刺激下においてluciferase活性の上昇を認めなかったが、サイトカインカクテル(IL-1β 50U/ml,TNFα 4000U/ml,LPS50μg/ml)刺激では4倍の活性上昇を認めた(P<0.01)。またAM mRNAの半減期は低酸素下、20%酸素下ともに約1.6時間であり、差を認めなかった。以上より低酸素下の腎ではAMの発現が冗進するが、その責任領域はAM遺伝子上流域(-1534/+70bp)以外にあることが示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Matsumoto A, Hirata Y: "The effect of nitric oxide on gas exchange in patients with congestive heart failure." Ann Intern Med. 130. 40-44 (1999)
• [文献書誌] Kakoki M, Hirata Y: "Effects of vasodilatory β-adrenoceptor antagonists on endothelium-derived nitric oxide release in rat kidney." Hypertension. 33. 467-471 (1999)
• [文献書誌] Hayakawa H, Hirata Y,: "Role of nitric oxide-cGMP Pathway in adrenomedullin-induced vasodilation in rat." Hypertension. 33. 689-693 (1999)
• [文献書誌] Kakoki M, Hirata Y,: "Effects of hypertension diabetes mellitus and hypercholesterolemia on endothelin type B receptor-mediated nitric oxide release from rat kidney." Circulation,. (in press).
• [文献書誌] Nagata D, Hirata Y,: "Hypoxia-induced adrenomedullin production in the kidney" Kidney Int,. (in press).
• [文献書誌] Suzuki E, Hirata Y: "Molecular mechanisms of endothelin-induced cell cycle progression phosphatidylinositol 3-kinase at distinct points." Circ Res. (in press).