アドレノメデュリンの循環器疾患における病態生理学的役割の解明と実験的治療の試み

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 10218208
• 研究機関: 宮崎医科大学
• 研究代表者: 江藤 胤尚 宮崎医科大学, 医学部, 教授 (10038854)
• 研究分担者: 加藤 丈司 宮崎医科大学, 医学部, 助手 (20274780) ; 今村 卓郎 宮崎医科大学, 医学部, 助手 (60203329) ; 河南 洋 宮崎医科大学, 医学部, 教授 (00049058) ; 栗原 裕基 熊本大学, 発生医学研究センター・組織識別, 教授 (20221947)
• キーワード: アドレノメデュリン / 心筋細胞 / 心線維芽細胞 / AM受容体 / CRLR / RAMP / AM遺伝子欠損マウス / コンビナントAM

研究概要

AM受容体の解析:種々のキメラおよびミュータントRAMP-2と3を作成してHEK293細胞に発現させた検討により、RAMP-2の86-92、RAMP-3の59-65のアミノ酸がAM結合とcAMP産生に重要であることが判明した。また、心筋細胞におけるRAMP-1とRAMP-3の遺伝子発現はアンジオテンシンII(AngII)により増加し、エンドセリン(ET-1)はCRLRとRAMP-3の遺伝子発現を増加させた。また、AngIIとET-1はともにAMに対する心筋細胞内cAMPの反応を増幅させた。AngIIやET-1が心筋におけるオートクリン・パラクリン因子であることを考慮すると、AMとこれらの心肥大促進因子は心筋局所において相互に作用を及ぼしている可能性が不唆された。AM遺伝子欠損マウスの作成と解析:AM遺伝子欠損マウス(KO)のホモ接合体は胎生致死であることが判明し、KOマウスでは野生型と比較して卵黄動脈の発達が不良であり、AMが妊娠の維持と固体発生に重要である可能性が考えられた。母体に外因性にAMを投与することにより、KOマウスの卵黄動脈の発達が認められ、在胎日数を延長することが可能であった。循環器疾患モデル動物におけるリコンビナントAMの有効性:コンビナントAM(rAM)の作成方法を確立し、低コストにて大量のAMの産生が可能になった。HPLCおよびmass spectrometryにより、このrAMが化学的に合成されたAMと同一であることが確認された。ラットの冠動脈を結紮することにより心筋梗塞モデルを作成して、rAMを心筋梗塞の急性期より静脈内に持続投与すると、心肥大と非梗塞左室心筋の線維化を抑制し左室拡張末期圧が低下した。in vitroの実験により、AMは心筋細胞の肥大抑制作用や心線維芽細胞の増殖抑制作用を有することが明らかにされており、AMが急性心筋梗塞や心不全の治療に有用である可能性が示唆された。

研究成果

• [文献書誌] TSURUDA, T., et al.: "Roles of protein kinase C and Ca^<2+>-dependent signaling in angiotensin II-induced adrenomedullin production in rat cardiac myocytes"J. Hypertens.. 19. 757-763 (2001)
• [文献書誌] TSURUDA, T., et al.: "Secretion of proadrenomedullin N-terminal 20 peptide from cultured neonatal rat cardiac cells"Life Sci.. 69. 239-245 (2001)
• [文献書誌] MISHIMA, K., et al.: "Effects of endothelin on adrenomedullin secretion and expression of adrenomedullin receptors in rat cardiomyocytes"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 287. 264-269 (2001)
• [文献書誌] KUWASAKO, K., et al.: "The seven amino acids of human RAMP2(86-92) and RAMP3(59-65) are critical for agonist binding to human adrenomedullin receptors"J. Biol. Chem.. 276. 264-269 (2001)
• [文献書誌] KITAMURA, K., et al.: "Adrenomedullin(11-26) : a novel endogenous hypertensive peptide isolated from bovine adrenal medulla"Peptide.. 22. 1713-1718 (2001)
• [文献書誌] MATSUI, E., et al.: "Biosynthesis and secretion of adrenomedullin and proadrenomedullin N-terminal 20 peptide in a rat model of endotoxin shock"Hypertens. Res.. 24. 543-549 (2001)